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linatracy

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[交流] 酶切鉴定图已有8人参与

大家帮忙看看，我这酶切鉴定的图，带特别淡，怎么样才可以使带变的亮呢？

Mark 为D15000的，后面两个都是酶切鉴定的

再注明一下，我跑28b的质粒的时候带就特别淡，之后做的连接，你们觉得是不是和我的质粒量少有关系呢？还有这样子的连接产物对表达量有没有关系？谢谢各位同仁了。

[ Last edited by linatracy on 2012-1-5 at 12:17 ]

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1楼2012-01-04 11:50:38

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linatracy

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引用回帖:

楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2012-01-05 18:48:12:
和你面对一样的问题，我一般重新提质粒，用高浓度的质粒酶切

你效果怎么样？

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9楼2012-01-06 00:13:31

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西瓜

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+3, 专家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39

上样量可以加大点。如果是全部都拿来上样的，那酶切的DNA就应该用多一点了。
酶切前可以粗略计算下你的DNA浓度有多少，然后根据片段长度估计下酶切之后的条带分别有多少ng，之后调整酶切的DNA量。EB染色的话10ng就可以看到条带，但建议你保证每条带都在50ng以上，这样的条带就不会淡了。

举个例子：100ng的4kb的质粒，完全酶切之后，一条带是3kb，另一条是1kb，那它们的量就分别是75gn和25ng。这样子的话1 kb的带会比较弱。所以你应该切至少200ng的质粒。
不过也不是多多益善，太多的质粒，会酶切不完全甚至切不动。而且质粒本身因为不同构型就有2、3条带，会干扰结果。

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2楼2012-01-04 12:32:22

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