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linatracy

金虫 (小有名气)

[交流] 酶切鉴定图 已有8人参与

大家帮忙看看,我这酶切鉴定的图,带特别淡,怎么样才可以使带变的亮呢?

Mark 为D15000的,后面两个都是酶切鉴定的

再注明一下,我跑28b的质粒的时候带就特别淡,之后做的连接,你们觉得是不是和我的质粒量少有关系呢?还有这样子的连接产物对表达量有没有关系?谢谢各位同仁了。

[ Last edited by linatracy on 2012-1-5 at 12:17 ]
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+1): 也是个方法! 2012-01-05 11:28:51
wanhscn(金币+2): 追加奖励! 2012-01-05 11:29:22
可以PS,带就亮了。。
不孝有三,读博为大!
4楼2012-01-04 18:22:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+3, 专家考核): good!whs 2012-01-04 20:33:39
上样量可以加大点。如果是全部都拿来上样的,那酶切的DNA就应该用多一点了。
酶切前可以粗略计算下你的DNA浓度有多少,然后根据片段长度估计下酶切之后的条带分别有多少ng,之后调整酶切的DNA量。EB染色的话10ng就可以看到条带,但建议你保证每条带都在50ng以上,这样的条带就不会淡了。

举个例子:100ng的4kb的质粒,完全酶切之后,一条带是3kb,另一条是1kb,那它们的量就分别是75gn和25ng。这样子的话1 kb的带会比较弱。所以你应该切至少200ng的质粒。
不过也不是多多益善,太多的质粒,会酶切不完全甚至切不动。而且质粒本身因为不同构型就有2、3条带,会干扰结果。
2楼2012-01-04 12:32:22
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lw19850128

银虫 (小有名气)

★ ★
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小丹木木(金币+1): 鼓励回帖 2012-01-04 15:40:48
染色剂用的什么?如果是EB或goldview1的话 建议提高点样量
3楼2012-01-04 14:24:03
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
你切的量少 多且量上样量再大些图就很好看啦
5楼2012-01-04 20:00:34
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