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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Elisa实验中，如何简便地验证酶标板的可靠性？
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tangwei3021

木虫 (初入文坛)

[求助] Elisa实验中，如何简便地验证酶标板的可靠性？

小弟做了十多次的Elisa，能够得到线性比较好的标准曲线，但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致，样品就更加惨不忍睹了，除了酶标板之外，其余封闭蛋白，抗体，抗体稀释度，等等条件都已经更换过，但是问题还是没能解决，怀疑是酶标板的问题。求教各位高手，有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性，小弟拜谢

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希望百倍的获取，必须千倍的付出
1楼 2012-01-02 20:33:56
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hongyestn

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
tangwei3021(金币+1): ★有帮助 2012-01-03 16:30:58
elisa本身灵敏性很高，每次做出来的值不一样很正常，特别是od值比较大的时候更是差别很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%内吧，好的数据是3%内
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2楼2012-01-03 11:55:32
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tangwei3021

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by hongyestn at 2012-01-03 11:55:32:
elisa本身灵敏性很高，每次做出来的值不一样很正常，特别是od值比较大的时候更是差别很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%内吧，好的数据是3%内

是这样没错，不过我的样品本身浓度就很低，OD值很小，稍微有点偏差就测不出来浓度了，头疼的不行
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希望百倍的获取，必须千倍的付出
3楼2012-01-03 12:35:08
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
tangwei3021(金币+5): ★★★很有帮助 受教了，感谢解答 2012-01-03 16:29:59
每次实验的标曲上同一浓度样品的OD值不一样是很正常的，这与抗原抗体反应体系、作用时间、显色时间等等一系列的因素有关。鉴定该ELISA体系是否可靠，最关键的指标是加标回收率和稀释线性，如果你怀疑的话可以做一下。一般来说，国外知名厂商的ELISA试剂盒是没有问题的。同时你还要看一下说明书中ELISA试剂盒的灵敏度，如果你的样品浓度低于该检测下限，则无法检测到，这是很正常的现象，并不是非要每个样品都要测出值才可以。
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4楼2012-01-03 15:49:57
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luqin1989

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

国内的试剂盒检测的结果一般灵敏性差，建议换试剂盒。还有可以先用PCR-elisa联合做，可以结果更好一点。
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共同学习，共同进步
5楼2012-05-13 16:32:39
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longqingci

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
tangwei3021: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-05-16 00:01:41
首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，最好看看文献里别人怎么做的
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6楼2012-05-15 11:40:46
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yanan901

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by longqingci at 2012-05-15 11:40:46
首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，最好看看文献里别人怎么做的

你好   有没有什么文献可以借鉴一下啊 谢啦~(*^__^*) 嘻嘻……
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Every cloud has a silverlining.
7楼2012-10-24 11:26:12
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ahchljctw

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by longqingci at 2012-05-15 11:40:46
首先要稳定所有的条件，不同的条件下做的板子读值不一样很正常。在同样条件下同批次的板子，如果测定不一样，就是包被问题或者保护剂的问题，但这两个都是各个试剂盒的机密，最好看看文献里别人怎么做的

有相关的文献么，能发我学习下么？感谢啦
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Stayhungry,stayfoolish
8楼2014-10-17 00:06:56
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