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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » gst标签蛋白的表达和纯化
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长
只是自己参考，所以不用那么精确。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
11楼2011-12-30 09:55:15
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wapw1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 落明逐暗 at 2011-12-30 09:55:15:
只是自己参考，所以不用那么精确。

- -~
12楼2011-12-30 13:05:45
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rhguo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hwamg at 2011-12-25 01:02:41:
1.        转8ml过夜小摇菌液接入800ml含氨苄的LB培养基（2L锥形瓶）, 37度摇菌至OD600至 0.6。
2.        诱导前取1ml菌液，也可使用转入其它质粒的未诱导的BI21菌株作对照。
这是没有诱导的对照，5000rpm，5min去上清，菌体 ...

这是你们实验室用的，包涵体怎么办；lysis buffer 的配方是什么，你们用得载体是什么
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13楼2012-04-27 17:01:52
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rhguo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 落明逐暗 at 2011-12-26 13:21:52:
菌株就是BL21，一般没什么问题。诱导表达的话视蛋白不同，达到最大量的时候也不同，建议自己做一下表达量曲线确定最佳时间，我是在诱导6小时后收菌。高压破碎后离心取上清和沉淀进行电泳，确定表达部位后，如果在 ...

包涵体怎么办呢？37诱导，我24度诱导都大部分是在包涵体里面的，不知道怎么办，只能先尿素溶解再透析，再复性了；你们有什么好办法吗？
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14楼2012-04-27 17:07:45
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落明逐暗

金虫 (正式写手)

好吃嘴班班长
24度诱导都是包涵体的话，那就没办法了。说明你的蛋白疏水性很高啊。GST纯化就得要变性溶了再复性了。。。不然你可以换成HIS标签，这样不用复性也能纯化。。。
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天涯静处无征战，兵气销为日月光。
15楼2012-04-28 09:45:09
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wapw1987

新虫 (小有名气)
一年后回来看下,发现没做前想的太多了,找个protocol看一下,再摸一下,so easy.
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16楼2013-06-30 14:24:53
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心醉神迷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wapw1987 at 2013-06-30 14:24:53
一年后回来看下,发现没做前想的太多了,找个protocol看一下,再摸一下,so easy.

楼主是怎么做的呢？能否分享一下你的protocol？和你纯化蛋白的经验？我现在要开始做呢，正在找相关的信息。先谢谢啦。
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17楼2014-06-24 09:34:05
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hustmqx

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落明逐暗 at 2011-12-30 09:54:43
其实很简单的，就是隔一个小时或者两个小时取1ml菌液，离心得菌体后直接SDSPAGE上样buffer重悬，然后沸水浴5min，取适量上样，看蛋白大小处的条带量就大概知道了，不复杂。

请问，直接破菌点PAGE胶，条带应该会很杂量很少的吧，这样能看出来吗？
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18楼2014-12-11 23:04:44
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