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zyfly

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助!!】关于蛋白质 肽谱~~~~~~~~大家帮忙啊!!

现在的样品就是粗蛋白,检测方法就是定氮法,但是被说检测方法不具有专属性,建议做肽谱研究。
       查了一些资料,肽谱是蛋白质鉴定的手段,用于这种粗蛋白的鉴定可行吗??
如果可行,有没有人能给提供个大体的试验思路?????
        先行谢过啊~~~~~~~~~~~~!!!
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daodao8657

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1): 鼓励积极应助! 2011-12-23 18:03:48
肽谱也是需要纯化后的蛋白,粗蛋白在检测时会有很多的杂峰干扰,不能确定哪个是目的蛋白的特征峰,所以无法检测
2楼2011-12-23 11:03:21
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zyfly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-23 11:03:21:
肽谱也是需要纯化后的蛋白,粗蛋白在检测时会有很多的杂峰干扰,不能确定哪个是目的蛋白的特征峰,所以无法检测

我也觉得无法检测,现在的样品就是粗蛋白,也没有确定的特征蛋白,如果要从头开始筛选,那是不是要很繁琐也需要很长时间???
3楼2011-12-24 09:13:21
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zhizhuo616

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不太清楚你主要目的?是要蛋白定量还是定性?
4楼2011-12-24 18:15:12
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daodao8657

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zyfly at 2011-12-24 09:13:21:
我也觉得无法检测,现在的样品就是粗蛋白,也没有确定的特征蛋白,如果要从头开始筛选,那是不是要很繁琐也需要很长时间???

蛋白的性质和在物种中的表达量都不同,有些蛋白很繁琐,也有很多蛋白很容易,要做肽谱的话不需要纯度95%以上,只要在SDS-PAGE上能和其他杂蛋白分开即可
5楼2011-12-26 10:28:22
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zyfly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by zhizhuo616 at 2011-12-24 18:15:12:
不太清楚你主要目的?是要蛋白定量还是定性?

是要定性,但是现在我的样品就是从贝类中提取的粗蛋白,要定性的话不是要把粗蛋白再分,纯化,才能进行肽谱???
6楼2011-12-26 11:59:22
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zyfly

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-26 10:28:22:
蛋白的性质和在物种中的表达量都不同,有些蛋白很繁琐,也有很多蛋白很容易,要做肽谱的话不需要纯度95%以上,只要在SDS-PAGE上能和其他杂蛋白分开即可

我的意思是,现在这种粗蛋白,可能含成百上千的蛋白,如果要通过肽谱定性,难道真的要把蛋白全做???
7楼2011-12-26 12:03:12
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daodao8657

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zyfly at 2011-12-26 12:03:12:
我的意思是,现在这种粗蛋白,可能含成百上千的蛋白,如果要通过肽谱定性,难道真的要把蛋白全做???

把蛋白全做不现实,可以先经过简单的分离后,确定了目的条带即可,只是部分纯化
8楼2011-12-26 13:03:05
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