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[求助]
用提取DNA做Genotyping的 PCR问题求助，谢谢@！
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替朋友求助，最近她在用小鼠尾巴提取的DNA做转基因鼠的genotyping PCR，但是一直没有目的条带，但是小鼠里肯定有杂合子的。其实应该是很成熟的方法，引物和条件都是成熟的。 再往前一段时间做的时候，第一次没做出来，第二次做出来过也就用普通的buffer，也没有什么特别。但是最近做了很多次都是目的条带没有，但是有的小鼠有非特异带，不是每个小鼠都有（有时候有很多条，有时候只在100多bp处有，目的条带应该在300bp），应该说明DNA没有问题吧。有时候100bp的带每个都有，也肯定不是引物二聚体，因为前面有二聚体条带。，她试过很多种buffer了，用得2Xbuffer 或者别人能做出来的几种buffer都试过了，还是如此。也试过降落PCR。重新提取的DNA也没有做出来。焦虑万分。请问高手会有什么问题？ DNA模板量过高或者过低？酚或乙醇残留？还是循环数过多？还是手法什么的原因？急盼回复！！ 万分感谢！ |
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