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借助于ADH酶来测PDC酶活性相关问题
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| 有没有人测过PDC(丙酮酸羧化酶)的活性，PDC酶能够催化丙酮酸生成乙醛，乙醛能在ADH（乙醇脱氢酶）的作用下生成乙醇，这个途径中NADH转化成NAD，不过ADH是个双向酶，它也能催化乙醇生成乙醛，这个方向NAD转化成NADH。我测PDC活性就是通过在反应体系（MES缓冲液，丙酮酸，NADH，ADH）中加入酶液，看NADH在340下的减少定义PDC的活性，可是在我实验过程中遇到个问题，有些样品加入酶液后NADH没减少反而上升，或者是先上升后下降，这个问题我应该怎么解决，求高手，求解答，谢谢~~ |
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3楼2011-12-19 14:59:10
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励分享 交流 2011-12-21 12:38:32
感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励分享 交流 2011-12-21 12:38:32
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尝试回答一下： （1）你所测的PDC样品应该不是纯的吧？这样的话，一定要注意PDC样品量要少，占最终反应体系的比例在2%或以下，NAD/NADH可以作为很多酶的底物，你的样品就有可能含有这些干扰酶，减少样品量有助于减少干扰。 （2）ADH酶要过量，比你样品PDC的活性要高出很多才行； （3）丙酮酸底物要过量，NADH要适量（注意初始吸光度在1.5左右最好）。 （4）检测时间要短，超过5min（或更短时间）后的数据就没有意义了。 以前做过相关的，暂时只记得这些，希望对你有所帮助。 |
2楼2011-12-16 13:21:25
4楼2011-12-19 15:33:16
5楼2011-12-30 11:21:23