| 查看: 2102 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
daodao8657金虫 (小有名气)
|
[求助]
等点聚焦电泳染色与脱色
|
|
|
在跑了等点聚焦电泳后，用考马斯亮蓝染液染色30min后，用脱色液脱色4天后还是不能脱色，请问是什么原因？对染色液和脱色液有什么要求吗？样品是已纯化的蛋白，为了测定等电点 试验中用的是bio-rad pH3-10的预制胶条，考马斯亮蓝染色液配方是：R-250 1g，甲醇 450ml，冰醋酸 100ml，蒸馏水 450ml。脱色液配方：甲醇 200ml，冰醋酸 200ml，蒸馏水 1600ml |
回复此楼» 猜你喜欢
极限拉扯，如何抉择
已经有15人回复
-
申请科研项目纯靠实力能成功吗？
已经有8人回复
-
中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理
已经有4人回复
-
40+中年人失业后，还能找到好工作吗？
已经有3人回复
-
二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores
已经有4人回复
-
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有13人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有7人回复
-
入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白电泳脱色后一条带都没有，求助各位大神~~~
已经有6人回复
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论
已经有17人回复
- 【资料】DNA提取、检测、PCR、电泳SSR
已经有262人回复
- 染色剂的浓度对DNA电泳亮度有多大影响
已经有5人回复
- 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，染色问题
已经有8人回复
- 核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色时，染色液，显色液，固定液是现配先用，还是多久换呢？
已经有23人回复
- SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
已经有5人回复
- 【求助/交流】疏水蛋白电泳和染色
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于等电聚焦电泳问题，不甚感激！！
已经有4人回复
- 【求助/交流】等电聚焦电泳系统的相关资料
已经有5人回复
daodao8657
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1916.6
- 帖子: 69
- 在线: 196.7小时
- 虫号: 525868
- 注册: 2008-03-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2011-12-14 17:00:47
zzq770204
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 13694.5
- 散金: 2589
- 红花: 8
- 帖子: 1728
- 在线: 452.9小时
- 虫号: 96206
- 注册: 2005-11-06
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
daodao8657(金币+5): 很有帮助，谢谢 2011-12-14 17:02:13
daodao8657(金币+5): 很有帮助，谢谢 2011-12-14 17:02:13
|
你得方法应该是考马斯亮蓝法，目前常用的有如下2个，给你参考下 经典的考马斯亮兰染色程序： 1 固定 20 % TCA 1h 2 染色 0.1% CBB in 40% EtOH/10% acetic acid 2h 3 脱色 40% EtOH&10% acetic acid 2x 30 min 4 强化 1% acetic acid overnight 5 清洗 deionized H2O 30 min 局限：灵敏度低（≈1μg protein/spot） Neuhoff 胶体考马斯亮兰染色 染色液成分：100 mL H2O和100 mL H3PO4 以及100 g粉末状(NH4)2SO4先溶解，然后加入1.2 g G-250再溶解，用水定容到800 mL，搅拌后加入200 mL甲醇，具体步骤如下： 1 固定：12％（w/v）三氯醋酸（TCA） 2h 2 染色：200ml染色液混合50ml甲醇 16-24h 3 漂洗： 1）0.1 mol/L Tris-H3PO4缓冲液（pH 6.5）漂洗两分钟； 2）25％（v/v）甲醇漂洗不超过1min 4 稳定：在20％的(NH4)2SO4中稳定蛋白质－染料复合物。 优点：背景低，灵敏度高，可达到200ng protein/spot. |
2楼2011-12-14 14:43:27
zzq770204
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 13694.5
- 散金: 2589
- 红花: 8
- 帖子: 1728
- 在线: 452.9小时
- 虫号: 96206
- 注册: 2005-11-06
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
4楼2011-12-14 19:16:08
5楼2012-03-31 10:27:05
200