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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白大小
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yanfeier

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白大小

最近在做蛋白纯化，结果蛋白在全菌，上清中大小位置是一直的，但是在纯化完之后，在SDS-PEGA中，纯化完之后酶液的大小和之前的全菌以及上清相比，位置小了一段。求助大家帮忙，谁知道什么原因造成的。急急急
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1楼2011-12-02 11:47:02
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allmessup

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流。 2011-12-02 19:50:51
amisking: 回帖置顶 2011-12-02 19:50:52
yanfeier(金币+10): 5 2011-12-05 11:54:49
引用回帖:
1楼: Originally posted by yanfeier at 2011-12-02 11:47:02:
最近在做蛋白纯化，结果蛋白在全菌，上清中大小位置是一直的，但是在纯化完之后，在SDS-PEGA中，纯化完之后酶液的大小和之前的全菌以及上清相比，位置小了一段。求助大家帮忙，谁知道什么原因造成的。急急急

首先是基础操作的问题——纯化尽量快，尽量在冰上进行~
其次你可以尝试带substrate的纯化，一些底物可能起到稳定比较flexible 的loop的作用；
实在不行你就切胶、digest、打质谱看看哪儿断了，针对性的想办法吧 ~~~~
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Ipsascientiapotestasest.
4楼2011-12-02 18:46:16
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普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-02 19:50:41
wanhscn(金币+3): the game rule 确实不能代表什么,真正的解决问题的就几个字,我也深有同感! 2011-12-02 22:45:26
可能是降解了。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

这些点是为了满足15个字符以上，和答案无关。**** THE Law，借用下海上钢琴师里面的一句台词吧。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-12-02 12:45:59
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yanfeier

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-12-02 12:45:59:
可能是降解了。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

这些点是为了满足15个字符以上，和答案无关。**** THE Law，借用下海上钢琴师里面的一句台词吧。

请问一下，有什么好的办法可以不让它降解吗？是否可以讲解一下。
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3楼2011-12-02 15:41:09
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enoch_lei

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！ whs 2011-12-03 08:48:43
如果是degrade的话，你可以加点protease inhibitor,另外，尽量保持所有buffer在冰里，然后fraction也放在冰里。你可以看看你的胶，看能不能找到molecular weight和接近你的protein的bands，确定是不是degraded了。
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5楼2011-12-03 04:42:08
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不知道你的酶是不是多聚酶，在SDS-PAGE过程各个亚基解聚，而电泳结果是亚基的条带？
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6楼2011-12-03 13:08:09
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