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yanfeier

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[求助] 蛋白大小

最近在做蛋白纯化，结果蛋白在全菌，上清中大小位置是一直的，但是在纯化完之后，在SDS-PEGA中，纯化完之后酶液的大小和之前的全菌以及上清相比，位置小了一段。求助大家帮忙，谁知道什么原因造成的。急急急

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1楼 2011-12-02 11:47:02

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allmessup

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励发帖交流。 2011-12-02 19:50:51
amisking: 回帖置顶 2011-12-02 19:50:52
yanfeier(金币+10): 5 2011-12-05 11:54:49

引用回帖:

1楼: Originally posted by yanfeier at 2011-12-02 11:47:02:
最近在做蛋白纯化，结果蛋白在全菌，上清中大小位置是一直的，但是在纯化完之后，在SDS-PEGA中，纯化完之后酶液的大小和之前的全菌以及上清相比，位置小了一段。求助大家帮忙，谁知道什么原因造成的。急急急

首先是基础操作的问题——纯化尽量快，尽量在冰上进行~
其次你可以尝试带substrate的纯化，一些底物可能起到稳定比较flexible 的loop的作用；
实在不行你就切胶、digest、打质谱看看哪儿断了，针对性的想办法吧 ~~~~