10楼: Originally posted by 夜舞龙 at 2011-12-01 21:09:16
楼上的都正解，高保真酶扩增是没有A的，不能T-A克隆。建议换平末端载体，可以直接克隆，比加A效果要好。比如用iInvitrogen平末端载体，或者国产的全式金平末端载体，我都用过，还是不错的。

18楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 13:35:26
做TA克隆时，直接用PCR产物跟pMD18载体连接，我的PCR产物结果较好，目标片段长度263bp，电泳时看不出非特异扩增，有引物二聚体。
1ul载体，4ulpcr产物，5ul自带的solutionI混合，16度连接过夜，42度热激45秒，冰上 ...

22楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-03-27 15:18:29
首先，还是你的PCR产物是没有A尾巴的，直接连T载体本来就很困难的。
2、PCR产物与T载体的比例也很重要，你可以多试几个梯度，注意是摩尔比
3、转化时，加入连接产物后是要先冰浴30Min的，然后再热击。
4、确保你 ...

21楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 13:36:27
做TA克隆时，直接用PCR产物跟pMD18载体连接，我的PCR产物结果较好，目标片段长度263bp，电泳时看不出非特异扩增，有引物二聚体。
1ul载体，4ulpcr产物，5ul自带的solutionI混合，16度连接过夜，42度热激45秒，冰上 ...

9楼: Originally posted by wickhamhan at 2011-12-01 19:42:39
平末端DNA片段加A方法
先对平末端PCR产物纯化后，浓度要求至少20ng/ ul（大概就好，跑胶图像条带清晰，明亮），取14.5 ul PCR产物，加入2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶，在72度反应10~20min后直接回收纯 ...

17楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-28 15:11:45
楼上都是正解，一般高保真酶是不加ployA的，所以肯定连不上T载体了哈，先加上A，再连，还是很好练的，或者你可以考虑直接用LA，因为那个也是扩出来有A的