24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3592)
>虫友互识 (809)
>论文投稿 (263)
>休闲灌水 (216)
>导师招生 (162)
>基金申请 (144)
>文献求助 (129)
>硕博家园 (95)
>考博 (78)
>公派出国 (71)
>博后之家 (67)
>教师之家 (61)
>考研 (51)
>论文道贺祈福 (41)
>招聘信息布告栏 (38)
>找工作 (33)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

木马。

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6
帖子: 1
在线: 14分钟
虫号: 1518758
注册: 2011-12-01

[交流] 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上已有19人参与

高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上。求指点。。

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2011-12-01 14:19:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

应助: 25 (小学生)
金币: 3171.1
散金: 10
红花: 2
帖子: 704
在线: 116.6小时
虫号: 880952
注册: 2009-10-22
专业: 检验医学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

18楼: Originally posted by 生物生物 at 2013-03-27 13:35:26
做TA克隆时，直接用PCR产物跟pMD18载体连接，我的PCR产物结果较好，目标片段长度263bp，电泳时看不出非特异扩增，有引物二聚体。
1ul载体，4ulpcr产物，5ul自带的solutionI混合，16度连接过夜，42度热激45秒，冰上 ...

首先，还是你的PCR产物是没有A尾巴的，直接连T载体本来就很困难的。
2、PCR产物与T载体的比例也很重要，你可以多试几个梯度，注意是摩尔比
3、转化时，加入连接产物后是要先冰浴30Min的，然后再热击。
4、确保你的抗生素有效，这个你需要做一个对照的。
此外，你的感受态以及载体是否也有效？