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木马。

新虫 (初入文坛)

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[交流] 高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上已有19人参与

高保真酶PCR产物连接pMD-19T载体，DH5a感受态，怎么总是连接不上。求指点。。

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1楼 2011-12-01 14:19:31

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冰风颤木

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by wickhamhan at 2011-12-01 19:42:39
平末端DNA片段加A方法
先对平末端PCR产物纯化后，浓度要求至少20ng/ ul（大概就好，跑胶图像条带清晰，明亮），取14.5 ul PCR产物，加入2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶，在72度反应10~20min后直接回收纯 ...

加A反应不是：
纯化PCR产物：7 ul
Taq缓冲液1 ul
2mmol/LdATP 1 ul
Taq酶 1 ul吗
我在书上看的没有做过实验准备做这个您看对吗