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含章冰婵

金虫 (小有名气)

[求助] 酶促动力学参数测定

各位虫友,小女子现在正在做酶的动力学研究,对于同一种底物,反应条件相同,为什么每次得到的Km值不同,有时得到的是6-10mmol/L,有时又是40-60mmol/L,想请问你们在做的时候,都需要注意些什么呢?底物浓度范围以般都怎么选取?
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

一定要做到差不多饱和,不然10倍差别是很常见的,这不是正常现象而是自摆乌龙。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2012-07-31 17:54:21
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查看全部 10 个回答

yhsun8033

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
linyingjia(金币+2): 不错 2011-12-05 19:15:48
含章冰婵(金币+2): 2011-12-18 00:04:02
一般来说,两次测定Km值有3-5倍的差别都是在允许范围内的,楼主两次测定相差将近10倍我觉得可以下从以下两个方面检查:
1. 楼主的测活体系中是不是有不稳定因素,如酶,如果两次用的酶不是一个批次,或者同批次酶放久部分失活了都可能导致这种差别;底物是不是在反应体系中不稳定,容易降解或者失活的等等
2.楼主计算Km时采取什么方法,如果纯手动原始计算,那么双倒数计算时斜率的一点变化就容易对Km的结果产生很大的影响

总之,建议楼主从细节处检查找找原因。
2楼2011-12-02 13:20:23
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yhsun8033

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

至于底物浓度的选取,可以先看看文献的报道,一般选取在Km值上下10倍的浓度范围
3楼2011-12-02 13:22:03
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我们实验室使用最大反应速率一半时底物的浓度即为Km值,我觉得还是很好的,不会偏差这么大吧
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
4楼2011-12-02 18:32:17
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