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酶促动力学参数测定
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| 各位虫友，小女子现在正在做酶的动力学研究，对于同一种底物，反应条件相同，为什么每次得到的Km值不同，有时得到的是6-10mmol/L，有时又是40-60mmol/L，想请问你们在做的时候，都需要注意些什么呢？底物浓度范围以般都怎么选取？ |
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liuyuexinfei
木虫 (著名写手)
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- 专业: 色谱分析
4楼2011-12-02 18:32:17
【答案】应助回帖
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linyingjia(金币+2): 不错 2011-12-05 19:15:48
含章冰婵(金币+2): 2011-12-18 00:04:02
linyingjia(金币+2): 不错 2011-12-05 19:15:48
含章冰婵(金币+2): 2011-12-18 00:04:02
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一般来说，两次测定Km值有3-5倍的差别都是在允许范围内的，楼主两次测定相差将近10倍我觉得可以下从以下两个方面检查： 1. 楼主的测活体系中是不是有不稳定因素，如酶，如果两次用的酶不是一个批次，或者同批次酶放久部分失活了都可能导致这种差别；底物是不是在反应体系中不稳定，容易降解或者失活的等等 2.楼主计算Km时采取什么方法，如果纯手动原始计算，那么双倒数计算时斜率的一点变化就容易对Km的结果产生很大的影响 总之，建议楼主从细节处检查找找原因。 |
2楼2011-12-02 13:20:23
3楼2011-12-02 13:22:03
5楼2011-12-04 22:46:11
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