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含章冰婵

金虫 (小有名气)

[求助] 酶促动力学参数测定

各位虫友,小女子现在正在做酶的动力学研究,对于同一种底物,反应条件相同,为什么每次得到的Km值不同,有时得到的是6-10mmol/L,有时又是40-60mmol/L,想请问你们在做的时候,都需要注意些什么呢?底物浓度范围以般都怎么选取?
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含章冰婵

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yhsun8033 at 2011-12-02 13:20:23:
一般来说,两次测定Km值有3-5倍的差别都是在允许范围内的,楼主两次测定相差将近10倍我觉得可以下从以下两个方面检查:
1. 楼主的测活体系中是不是有不稳定因素,如酶,如果两次用的酶不是一个批次,或者同批次酶 ...

谢谢。想和你讨论一个问题,在王镜岩生化书中提到:在一定的反应条件下,Km是不随酶浓度变化而改变,所以对你提到的酶失活会影响Km,我有不解,还请指教。
5楼2011-12-04 22:46:11
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含章冰婵

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyuexinfei at 2011-12-02 18:32:17:
我们实验室使用最大反应速率一半时底物的浓度即为Km值,我觉得还是很好的,不会偏差这么大吧

谢谢哈
6楼2011-12-04 23:12:31
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