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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 学术交流区 » 论文投稿 » 投稿求助 » 审稿意见求助，关于ELISA法，谢谢！
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Tracyli

铁虫 (正式写手)

[求助] 审稿意见求助，关于ELISA法，谢谢！

paper审稿意见回来了，其中有一点不是很明白，请各位大虾帮帮忙，先谢谢了！！！！
我的论文里有个实验是用ELISA法（不是用试剂盒）测定血清中流感病毒特异性抗体IgG的含量，方法如下：
    用流感病毒液（病毒滴度为105.0 TCID50/mL）包被96孔板，4℃下保存16h。在包被孔中加入50μl 的1%小牛血清-含0.05%吐温20 PBS溶液（PBST），然后分别加入50μl不同稀释度的小鼠血清，设复孔、阴性对照，37℃下培养1h。用PBST洗三次，加入l：200 HRP标记的羊抗小鼠lgG抗体，培养1h后用PBST洗板，每孔加入50μl的OPD-H202底物显色，用H2SO4终止反应。空白调零后，在酶标仪上测定各孔的光密度（405 nm）。然后我将各组的OD值均数作图放在结果上。
    审稿人提出 “data should not be presented as OD but rather in absolute values (i.e. pg/ml or IU)”
    我以前没做过ELISA，这个实验如果要测出病毒特异性抗体的含量，应该是要用特异性抗体（明确含量）的血清做标准曲线吧？但是这样是不是要纯化病毒特异性抗体呢？还是用普通的小鼠抗体IgG加入血清做标准曲线即可呢？
    有哪位虫友做过这方面的实验呢？
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1楼 2011-11-25 12:10:23
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grandstone

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Tracyli(金币+5): 谢谢！ 2011-11-25 19:00:00
最好不要用OD值，或者你用抑制率来表示呢？
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4楼2011-11-25 16:33:33
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jiezibeilin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
seapass(金币+3): 鼓励新虫交流！欢迎常来投稿版！ 2011-11-25 13:44:10
Tracyli(金币+5): 谢谢！ 2011-11-25 16:06:59
1.审稿人提出的问题的意思是：你在文中表述数据结果的时候不应该是OD值，应该是你测定的目标抗体的含量，就是要把你测定的OD值根据标准曲线计算成抗体含量（单位用pg/ml或者是国际单位）
2.你关于标准曲线的疑惑：
你的目的是要测定流感病毒特异性抗体，所以你肯定要用流感病毒特异性抗体（已知浓度）来坐标准曲线。 这一点我能肯定。
另外，是不是需要纯化的病毒特异性抗体，从理论上来说，应该是要纯化的，但是我没有做过。这一点我不能确定。抱歉。
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2楼2011-11-25 13:40:33
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Tracyli

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiezibeilin at 2011-11-25 13:40:33:
1.审稿人提出的问题的意思是：你在文中表述数据结果的时候不应该是OD值，应该是你测定的目标抗体的含量，就是要把你测定的OD值根据标准曲线计算成抗体含量（单位用pg/ml或者是国际单位）
2.你关于标准曲线的疑惑 ...

如果是要用病毒的特异性抗体就郁闷了，从血清里分离病毒特异性抗体到做标准曲线，估计等我把这部分工作做完，也得半年了，因为以前没做过...如果我坚持用OD值，不做标准曲线了，我又担心直接被拒掉了，哎
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3楼2011-11-25 16:15:04
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Tracyli

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by grandstone at 2011-11-25 16:33:33:
最好不要用OD值，或者你用抑制率来表示呢？

我的药是增强免疫的，不能用抑制率吧？而且用抑制率怎么回答审稿人呢？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-25 17:46:39
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