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Tracyli

铁虫 (正式写手)

[求助] 审稿意见求助,关于ELISA法,谢谢!

paper审稿意见回来了,其中有一点不是很明白,请各位大虾帮帮忙,先谢谢了!!!!
我的论文里有个实验是用ELISA法(不是用试剂盒)测定血清中流感病毒特异性抗体IgG的含量,方法如下:
    用流感病毒液(病毒滴度为105.0 TCID50/mL)包被96孔板,4℃下保存16h。在包被孔中加入50μl 的1%小牛血清-含0.05%吐温20 PBS溶液(PBST),然后分别加入50μl不同稀释度的小鼠血清,设复孔、阴性对照,37℃下培养1h。用PBST洗三次,加入l:200 HRP标记的羊抗小鼠lgG抗体,培养1h后用PBST洗板,每孔加入50μl的OPD-H202底物显色,用H2SO4终止反应。空白调零后,在酶标仪上测定各孔的光密度(405 nm)。然后我将各组的OD值均数作图放在结果上。
    审稿人提出 “data should not be presented as OD but rather in absolute values (i.e. pg/ml or IU)”
    我以前没做过ELISA,这个实验如果要测出病毒特异性抗体的含量,应该是要用特异性抗体(明确含量)的血清做标准曲线吧?但是这样是不是要纯化病毒特异性抗体呢?还是用普通的小鼠抗体IgG加入血清做标准曲线即可呢?
    有哪位虫友做过这方面的实验呢?
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grandstone

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Tracyli(金币+5): 谢谢! 2011-11-25 19:00:00
最好不要用OD值,或者你用抑制率来表示呢?
4楼2011-11-25 16:33:33
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jiezibeilin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
seapass(金币+3): 鼓励新虫交流!欢迎常来投稿版! 2011-11-25 13:44:10
Tracyli(金币+5): 谢谢! 2011-11-25 16:06:59
1.审稿人提出的问题的意思是:你在文中表述数据结果的时候不应该是OD值,应该是你测定的目标抗体的含量,就是要把你测定的OD值根据标准曲线计算成抗体含量(单位用pg/ml或者是国际单位)
2.你关于标准曲线的疑惑:
你的目的是要测定流感病毒特异性抗体,所以你肯定要用流感病毒特异性抗体(已知浓度)来坐标准曲线。 这一点我能肯定。
另外,是不是需要纯化的病毒特异性抗体,从理论上来说,应该是要纯化的,但是我没有做过。这一点我不能确定。抱歉。
2楼2011-11-25 13:40:33
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Tracyli

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiezibeilin at 2011-11-25 13:40:33:
1.审稿人提出的问题的意思是:你在文中表述数据结果的时候不应该是OD值,应该是你测定的目标抗体的含量,就是要把你测定的OD值根据标准曲线计算成抗体含量(单位用pg/ml或者是国际单位)
2.你关于标准曲线的疑惑 ...

如果是要用病毒的特异性抗体就郁闷了,从血清里分离病毒特异性抗体到做标准曲线,估计等我把这部分工作做完,也得半年了,因为以前没做过...如果我坚持用OD值,不做标准曲线了,我又担心直接被拒掉了,哎
3楼2011-11-25 16:15:04
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Tracyli

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by grandstone at 2011-11-25 16:33:33:
最好不要用OD值,或者你用抑制率来表示呢?

我的药是增强免疫的,不能用抑制率吧?而且用抑制率怎么回答审稿人呢?谢谢
5楼2011-11-25 17:46:39
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