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审稿意见求助,关于ELISA法,谢谢!
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paper审稿意见回来了,其中有一点不是很明白,请各位大虾帮帮忙,先谢谢了!!!! 我的论文里有个实验是用ELISA法(不是用试剂盒)测定血清中流感病毒特异性抗体IgG的含量,方法如下: 用流感病毒液(病毒滴度为105.0 TCID50/mL)包被96孔板,4℃下保存16h。在包被孔中加入50μl 的1%小牛血清-含0.05%吐温20 PBS溶液(PBST),然后分别加入50μl不同稀释度的小鼠血清,设复孔、阴性对照,37℃下培养1h。用PBST洗三次,加入l:200 HRP标记的羊抗小鼠lgG抗体,培养1h后用PBST洗板,每孔加入50μl的OPD-H202底物显色,用H2SO4终止反应。空白调零后,在酶标仪上测定各孔的光密度(405 nm)。然后我将各组的OD值均数作图放在结果上。 审稿人提出 “data should not be presented as OD but rather in absolute values (i.e. pg/ml or IU)” 我以前没做过ELISA,这个实验如果要测出病毒特异性抗体的含量,应该是要用特异性抗体(明确含量)的血清做标准曲线吧?但是这样是不是要纯化病毒特异性抗体呢?还是用普通的小鼠抗体IgG加入血清做标准曲线即可呢? 有哪位虫友做过这方面的实验呢? |
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grandstone
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