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zibeisha

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 436.5小时
虫号: 476026
注册: 2007-12-09
专业: 水产生物营养与饲料学

[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右，现在连接到Pcdf-dute和pet-32a，每个都转到BL-21和Rosste中，诱导过后，sds-page检测，可是却不表达，诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度，IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm，培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基，都没有表达，现在郁闷死了，无计可施了，各位大侠帮帮忙。

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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。

1楼 2011-11-20 20:27:24

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凡子1985

银虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 细胞周期与调控

引用回帖:

11楼: Originally posted by zibeisha at 2011-11-21 16:51:17:
呵呵，虽然是膜蛋白，不过我选取的是非跨膜区的，这样的话受膜蛋白的影响就比较小了吧？我们实验室原来做过同样的实验，也是选取膜蛋白上非跨膜区的具有免疫原性的进行表达，都没我这麻烦。

其实说实话你的这个免疫原多肽很小，不知道你的page系统是真的检测到了还是没有标签用的是什么建议还是用GST 纯化后将GST切除后做抗体