24小时热门版块排行榜    

查看: 2344  |  回复: 25
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zibeisha

木虫 (著名写手)

[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右,现在连接到Pcdf-dute和pet-32a,每个都转到BL-21和Rosste中,诱导过后,sds-page检测,可是却不表达,诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度,IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm,培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基,都没有表达,现在郁闷死了,无计可施了,各位大侠帮帮忙。
回复此楼
有时我们无奈,有时我们迷茫,可是不管怎样,只要我们积极生活,命运就不会亏待我们。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凡子1985

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by zibeisha at 2011-11-21 16:51:17:
呵呵,虽然是膜蛋白,不过我选取的是非跨膜区的,这样的话受膜蛋白的影响就比较小了吧?我们实验室原来做过同样的实验,也是选取膜蛋白上非跨膜区的具有免疫原性的进行表达,都没我这麻烦。

其实说实话你的这个免疫原多肽很小,不知道你的page系统是真的检测到了 还是没有 标签用的是什么 建议还是用GST 纯化后 将GST切除后做抗体
13楼2011-11-21 17:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

zibeisha

木虫 (著名写手)

自己先顶一下,希望懂行的人看到帮帮忙!
有时我们无奈,有时我们迷茫,可是不管怎样,只要我们积极生活,命运就不会亏待我们。
2楼2011-11-20 21:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


zibeisha(金币+1): 这个载体没有试过。 2011-11-21 08:37:25
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-22 18:08:10
转速试过吗?不知道楼主实验室用过PGEX载体吗?
jiayoubashaonian
3楼2011-11-20 21:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

llglo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zibeisha(金币+1): 2011-11-21 08:40:57
西瓜(金币-3): 广告贴 2011-11-21 20:02:03
西瓜:编辑内容 2011-11-21 20:02
------------广告贴-------------

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-21 at 20:02 ]
4楼2011-11-20 23:12:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见