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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 请教研究农杆菌的虫友
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xn712100

银虫 (正式写手)

[求助] 请教研究农杆菌的虫友

我现在在做农杆菌介导的遗传转化，总觉得转化效率太低。我想试着去调整农杆菌的状态和浓度。但是，我不知道怎么去确定我所培养的农杆菌处于指数生长期，想请教有经验的虫友。还有农杆菌侵染的最佳时期真的是指数生长时期吗？怎么处理培养好的菌液，收集的菌体要怎样处理才能更好的保持它的侵染活性？
如果有相关的文献的话，也请虫友能分享一下。
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1楼 2011-11-19 16:37:20
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玛格丽特1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-29 08:48:46
我用的是农杆菌菌株GV3101，OD值0.4-0.6之间时长的很快，但是不知道什么时候侵染最好，希望得到帮助！
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3楼2011-11-28 23:02:24
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hanmao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xn712100(金币+5): 谢谢！我现在转化的是马铃薯。你是指侵染时的ＯＤ值吗？我需要先把农杆菌培养到一定时期，收集菌体用液体ＭＳ悬浮后，再以０.５－１.０的ＯＤ值进行侵染，但是效果不是很好。 2011-11-29 08:38:26
这要看你的菌株类型，文献上写的也不是很统一。
农杆菌菌株GV3101一般我们选用OD600为0.8时进行侵染，你转化受体是哪种植物啊
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嘎嘎
2楼2011-11-28 09:07:16
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lgqcc

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-11-29 08:49:00
xn712100(金币+5): 谢谢！您说的这三种菌株我都有做过，个人觉得ＥＨＡ１０５要好一点。您所说的梯度实验，我也做过但是效果不明显。对遗传转化来说，实验周期太长。个人觉得转化时菌株的状态比较重要，想知道怎么判断菌株的活力水平，以及收集菌体后如何保持它的活力状态。希望您不惜赐教！ 2011-11-29 10:05:54
引用回帖:
3楼: Originally posted by 玛格丽特1985 at 2011-11-28 23:02:24:
我用的是农杆菌菌株GV3101，OD值0.4-0.6之间时长的很快，但是不知道什么时候侵染最好，希望得到帮助！

没做过这种的，我用过LBA4404、AGL-1、EHA105，不同菌株的最适合OD值是不一样的，建议从0.6-1.0做一个梯度试验。转化效率和宿主的状态、共孵育条件都有很大关系，祝好运。
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4楼2011-11-29 08:16:27
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hanmao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先用LB过夜摇菌，达到OD0.8，再离心用同等量侵染液悬浮，侵染液应该是1/2MS的高渗溶液，侵染液的配方各个实验室不一样，悬浮后可以再放到28度摇床二十分钟，后进行侵染，可以加乙酰丁香酮。
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嘎嘎
5楼2011-11-29 09:01:10
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