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xn712100

银虫 (正式写手)

[求助] 请教研究农杆菌的虫友

我现在在做农杆菌介导的遗传转化,总觉得转化效率太低。我想试着去调整农杆菌的状态和浓度。但是,我不知道怎么去确定我所培养的农杆菌处于指数生长期,想请教有经验的虫友。还有农杆菌侵染的最佳时期真的是指数生长时期吗?怎么处理培养好的菌液,收集的菌体要怎样处理才能更好的保持它的侵染活性?
如果有相关的文献的话,也请虫友能分享一下。
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hanmao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xn712100(金币+5): 谢谢!我现在转化的是马铃薯。你是指侵染时的OD值吗?我需要先把农杆菌培养到一定时期,收集菌体用液体MS悬浮后,再以0.5-1.0的OD值进行侵染,但是效果不是很好。 2011-11-29 08:38:26
这要看你的菌株类型,文献上写的也不是很统一。
农杆菌菌株GV3101一般我们选用OD600为0.8时进行侵染,你转化受体是哪种植物啊
嘎嘎
2楼2011-11-28 09:07:16
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hanmao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先用LB过夜摇菌,达到OD0.8,再离心用同等量侵染液悬浮,侵染液应该是1/2MS的高渗溶液,侵染液的配方各个实验室不一样,悬浮后可以再放到28度摇床二十分钟,后进行侵染,可以加乙酰丁香酮。
嘎嘎
5楼2011-11-29 09:01:10
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