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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何解决分光度法测量时出现的试剂乳化问题
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wenjingcat

至尊木虫 (知名作家)

[求助] 如何解决分光度法测量时出现的试剂乳化问题

请教诸位大侠：做抗氧化试验时，样品为乙酸乙酯提取物，用甲醇溶解后做清除羟自由基试验，加入显色剂（水杨酸，FeSO4,H2O2）时产生乳化现象干扰吸光度测量，如何解决？紫外-可见分光光度法测量总黄酮时，如何解决样品本身自带的颜色对吸光度的影响？？一些溶解于低极性试剂的物质如石油醚提取物，乙酸乙酯提取物，在需要加入水溶液试剂，然后用分光光度法测量时，怎样解决溶剂乳化的问题？？？
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我的眼里只有小白，哈哈
1楼 2011-11-18 09:07:28
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wenjingcat at 2011-11-18 17:53:56:
有考虑是溶质析出，但是用10000r/min离心后溶液仍然是浑浊的，吸光度很高。总黄酮测定时用芦丁做标准曲线，由于样品自带颜色，测吸光度时远超芦丁的线性范围。测波长差是如何操作的？

溶剂之间的相溶性不好，所致！
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5楼2011-11-21 08:02:41
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

wenjingcat(金币+20): 谢谢回复 2011-11-18 17:53:32
引用回帖:
1楼: Originally posted by wenjingcat at 2011-11-18 09:07:28:
请教诸位大侠：做抗氧化试验时，样品为乙酸乙酯提取物，用甲醇溶解后做清除羟自由基试验，加入显色剂（水杨酸，FeSO4,H2O2）时产生乳化现象干扰吸光度测量，如何解决？紫外-可见分光光度法测量总黄酮时，如何解决 ...

你所描述的现象应该不算是乳化现象，应该属于溶剂的极性变化后，里面的溶质或加入的物质析出，或者两者溶剂不互溶所致！
没办法的，只能通过改变溶剂，把甲醇换为乙醇，或异丙醇试验一下了！
黄酮测定问题，背景吸收扣除问题，可以分离总黄酮，将固体溶解后再测定
也可以取不含黄酮的溶液做参比，然后在测定
也可以看一下二者的波长差，看能否错开一点（比如黄酮不取最大波长位置！）
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2楼2011-11-18 09:32:27
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wenjingcat

至尊木虫 (知名作家)
有考虑是溶质析出，但是用10000r/min离心后溶液仍然是浑浊的，吸光度很高。总黄酮测定时用芦丁做标准曲线，由于样品自带颜色，测吸光度时远超芦丁的线性范围。测波长差是如何操作的？
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我的眼里只有小白，哈哈
3楼2011-11-18 10:07:22
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wenjingcat

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chaijudi at 2011-11-18 09:32:27:
你所描述的现象应该不算是乳化现象，应该属于溶剂的极性变化后，里面的溶质或加入的物质析出，或者两者溶剂不互溶所致！
没办法的，只能通过改变溶剂，把甲醇换为乙醇，或异丙醇试验一下了！
黄酮测定问题，背 ...

有考虑是溶质析出，但是用10000r/min离心后溶液仍然是浑浊的，吸光度很高。总黄酮测定时用芦丁做标准曲线，由于样品自带颜色，测吸光度时远超芦丁的线性范围。测波长差是如何操作的？
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4楼2011-11-18 17:53:56
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