24小时热门版块排行榜    

查看: 4441  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xan36

新虫 (小有名气)

[求助] 请问血清RNA怎样提取?又怎样验证已提取出血清RNA? 已有7人参与

如题:请问血清RNA怎样提取?又怎样验证已提取出血清RNA?
谢谢!!
回复此楼
风雨后的阳光更珍贵
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

血清中有白细胞,怎么就没有b-actin了?把RNA逆转录成cDNA,以此为模板利用内参引物如:GAPDH.b-actin扩增,只要有一点RNA就会扩出条带,除非你的逆转录体系有问题,不过这样不能验证你的RNA降解严重与否
15楼2014-07-25 14:38:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

longrna

新虫 (正式写手)

有多大体积的血清?什么物种?提到后续实验做什么?要多少ng RNA?有什么特殊要求?
伟大航线....
2楼2011-11-17 16:12:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xan36

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大体积的血清?什么物种?提到后续实验做什么?要多少ng RNA?有什么特殊要求?

有1ml左右的血清,是正常人的,想验证下血清中有没有我所要的目的基因,想提出来后做个PCR,要求的话符合PCR扩增的要求就可
谢谢!
风雨后的阳光更珍贵
3楼2011-11-18 08:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

★ ★
wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-19 18:31:46
人血液(全血,也就医学上说的外周血)中RNA的含量很低,1ml一般在3ug左右(1-7ug)。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路:
1)直接处理抗凝的全血,即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点:处理的体积血液体积有限,一般1ml Trizol处理100ul血液,最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞(即淋巴细胞),然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点:只能提取得到淋巴细胞的RNA,血液中游离的如病毒RNA无法提得。

你的血清是直接离心分离的吗?  如果只是做PCR,估计你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再从长计议。。。


血液是很复杂的。。。
伟大航线....
4楼2011-11-18 09:52:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 70/3500 2026-08-16 08:29 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见