24小时热门版块排行榜    

查看: 3885  |  回复: 46
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题,基因片段3.7Kb载体7Kb,Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆,要么长出来也是假阳性,小提质粒后酶切片段大小不对额
大片段不好连呢,求高手指教有妙招改进么??
(转化采用的超级感受态细胞,42度30s)
回复此楼
许多奇迹,我们相信,才会实现……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

引用回帖:
30楼: Originally posted by liuxing5157 at 2011-11-18 22:07:31:
完全同意你的看法,我虽然现在才研一,但目前构建的载体不下30个,什么样的片段没有连接过!!!他那句话太不负责任啦!

额,我也研一。不要纠结了哈。不要把气氛搞得太那啥了哈,只是为了学术讨论哈
许多奇迹,我们相信,才会实现……
31楼2011-11-18 22:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 47 个回答

longrna

新虫 (正式写手)

贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?
伟大航线....
2楼2011-11-17 18:06:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

我们一般4度过夜连接,用NEB的酶
伟大航线....
3楼2011-11-17 18:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 18:06:25:
贴上你的连接体系及条件嘛,用哪家公司的酶?

takara的连接酶,16度过夜的
许多奇迹,我们相信,才会实现……
4楼2011-11-17 18:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见