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zhhuijun
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转基因植物检测
各位虫友,我在检测转基因植物时,第一次PCR我转的基因出来了,很高兴。以为转进去了,我想在PCR一次,可为什么就没了。郁闷?请教各位呀。
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1楼
2011-11-17 08:59:31
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【答案】应助回帖
用的什么酶? 什么程序?
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2楼
2011-11-17 09:29:24
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sxxuan
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
zhhuijun(金币+1): 我用的是TAq酶 2011-11-17 10:10:47
silicare(金币+3, BioEPI+1): 很详细 2011-11-17 12:12:18
看下引物,酶有没有问题,一般就这两个比较容易降解。
提取的模板有没有降解?
这个检测很容易有假阳性呢。所以正负对照一定要设好。
一般我都算阳性的再重复两次,才确定是阳性。
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你的日子如何,你的力量也必如何!
3楼
2011-11-17 09:36:58
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zhhuijun
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2楼
:
Originally posted by
横眉
at 2011-11-17 09:29:24:
用的什么酶? 什么程序?
我用的就是能前做菌液PCR的程序。谢谢,YAq酶
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4楼
2011-11-17 10:16:49
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3楼
:
Originally posted by
sxxuan
at 2011-11-17 09:36:58:
看下引物,酶有没有问题,一般就这两个比较容易降解。
提取的模板有没有降解?
这个检测很容易有假阳性呢。所以正负对照一定要设好。
一般我都算阳性的再重复两次,才确定是阳性。
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需要多几次重复性进行验证确定
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5楼
2011-11-17 10:32:00
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zhhuijun
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5楼
:
Originally posted by
winter0121
at 2011-11-17 10:32:00:
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需要多几次重复性进行验证确定
好的。我在PCR一次吧
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6楼
2011-11-17 10:40:21
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如果重复不出来,估计假阳性的可能性较大,做杂交吧
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2011-11-17 10:58:29
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★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-17 12:12:36
PCR程序体系最好再优化一下,转基因检测和菌液PCR的体系和程序还是有些差别的,我当时是优化了1个多月呢,这样结果就会稳定了,最好还是做下SDS和WB鉴定
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8楼
2011-11-17 11:18:05
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★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-17 12:12:45
基因组模板和菌液确实差异很大,优化程序是必须的。
另外你的载体上是否有报告基因啊,GUS或GFP什么的?多种检测方法互相验证可能会更准确。
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9楼
2011-11-17 11:59:51
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sxxuan
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忘了问是第几代的转基因,就算证实了是阳性还有继续筛选到纯合的转基因植株呢
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10楼
2011-11-17 15:21:40
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