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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因植物检测
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zhhuijun

木虫 (正式写手)

[求助] 转基因植物检测

各位虫友，我在检测转基因植物时，第一次PCR我转的基因出来了，很高兴。以为转进去了，我想在PCR一次，可为什么就没了。郁闷？请教各位呀。
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1楼 2011-11-17 08:59:31
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横眉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用的什么酶？ 什么程序？
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2楼2011-11-17 09:29:24
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhhuijun(金币+1): 我用的是TAq酶 2011-11-17 10:10:47
silicare(金币+3, BioEPI+1): 很详细 2011-11-17 12:12:18
看下引物，酶有没有问题，一般就这两个比较容易降解。
提取的模板有没有降解？
这个检测很容易有假阳性呢。所以正负对照一定要设好。
一般我都算阳性的再重复两次，才确定是阳性。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2011-11-17 09:36:58
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zhhuijun

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 横眉 at 2011-11-17 09:29:24:
用的什么酶？ 什么程序？

我用的就是能前做菌液PCR的程序。谢谢，YAq酶
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4楼2011-11-17 10:16:49
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winter0121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sxxuan at 2011-11-17 09:36:58:
看下引物，酶有没有问题，一般就这两个比较容易降解。
提取的模板有没有降解？
这个检测很容易有假阳性呢。所以正负对照一定要设好。
一般我都算阳性的再重复两次，才确定是阳性。

赞成
需要多几次重复性进行验证确定
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5楼2011-11-17 10:32:00
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zhhuijun

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by winter0121 at 2011-11-17 10:32:00:
赞成
需要多几次重复性进行验证确定

好的。我在PCR一次吧
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6楼2011-11-17 10:40:21
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长青树

铜虫 (小有名气)
如果重复不出来，估计假阳性的可能性较大，做杂交吧
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7楼2011-11-17 10:58:29
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jjxcz

金虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-17 12:12:36
PCR程序体系最好再优化一下，转基因检测和菌液PCR的体系和程序还是有些差别的，我当时是优化了1个多月呢，这样结果就会稳定了，最好还是做下SDS和WB鉴定
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8楼2011-11-17 11:18:05
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xn712100

银虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-11-17 12:12:45
基因组模板和菌液确实差异很大，优化程序是必须的。
另外你的载体上是否有报告基因啊，ＧＵＳ或ＧＦＰ什么的？多种检测方法互相验证可能会更准确。
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9楼2011-11-17 11:59:51
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sxxuan

金虫 (著名写手)
忘了问是第几代的转基因，就算证实了是阳性还有继续筛选到纯合的转基因植株呢
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2011-11-17 15:21:40
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