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jingzixy

新虫 (小有名气)

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性别: MM
专业: 临床生物化学检验

[求助] 温度敏感型质粒

我要在芽孢菌中敲基因，用到低温敏感型质粒，但搞不明白其筛选原理。发生重组后，我需要的菌是怎么筛出来的？低温抗性板、低温无抗性板、高温抗性板、高温无抗性板，是哪一个？希望哪位高手能指导一下，谢谢！

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1楼 2011-11-16 16:17:35

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wanghuan2012

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物遗传学

【答案】应助回帖

是用的Wanner的一步重组敲除么？
我用的温度敏感型质粒在30℃是能够复制，但在42℃时就不能复制，导致其直接丢失。。
在这方法中用到的温敏型质粒是帮助质粒，在进行重组时用低温抗性平板筛选；筛到阳性克隆后，再在42℃进行培养，丢掉质粒。。。
推荐Wanner关于一部重组敲除的文章。

2楼2012-11-21 23:51:17

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繁梦倾城

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专业: 生物技术药物

你好，用的上pKOR1质粒吗

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3楼2021-07-20 07:17:16

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繁梦倾城

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专业: 生物技术药物

用的是pKOR1质粒吗，我最近在用这个质粒敲除肉葡萄球菌基因，有机会可以交流下

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4楼2021-07-20 07:18:43

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