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jingzixy

新虫 (小有名气)

[求助] 温度敏感型质粒

我要在芽孢菌中敲基因,用到低温敏感型质粒,但搞不明白其筛选原理。发生重组后,我需要的菌是怎么筛出来的?低温抗性板、低温无抗性板、高温抗性板、高温无抗性板,是哪一个?希望哪位高手能指导一下,谢谢!
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wanghuan2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是用的Wanner的一步重组敲除么?
我用的温度敏感型质粒在30℃是能够复制,但在42℃时就不能复制,导致其直接丢失。。
在这方法中用到的温敏型质粒是帮助质粒,在进行重组时用低温抗性平板筛选;筛到阳性克隆后,再在42℃进行培养,丢掉质粒。。。
推荐Wanner关于一部重组敲除的文章。
2楼2012-11-21 23:51:17
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繁梦倾城

新虫 (小有名气)

3楼2021-07-20 07:17:16
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繁梦倾城

新虫 (小有名气)

用的是pKOR1质粒吗,我最近在用这个质粒敲除肉葡萄球菌基因,有机会可以交流下

发自小木虫Android客户端
4楼2021-07-20 07:18:43
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