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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 绿色荧光蛋白的观察与表达 已有1人参与

最近一直在做绿色荧光蛋白的观察与表达,用的载体是大肠杆菌-苏云金穿梭载体,已经加入了一个强启动子和GFP,电转化至野生的枯草芽孢杆菌和消除了内生质粒的苏云金芽孢杆菌中,已经验证构建的质粒转进去了
目前的实验结果:
1、用荧光显微镜观察不到任何的荧光;
2、将摇了20h的菌液离心收集菌体,超声波破碎,取上清跑SDS-PAGE,结果显示:在30KDa左右消除内生质粒的苏云金芽孢杆菌有两条带,而未转化GFP的苏云金芽孢杆菌只有一条带(与其中一条带平行),转了和没转的枯草芽孢杆菌则都没有
这样的结果到底GFP表达了没有呢???说明说明问题??
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飞鸟514

铁虫 (初入文坛)

楼主是如何转化的?能告诉我详细的操作方法吗?我怎么转也转不进去
2楼2016-12-19 16:46:13
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

如果产生有功能的GFP,菌体直接显示绿色;如果要验证是否产生GFP(尤其是无功能的)用WB。
3楼2016-12-20 11:21:21
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