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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 等度洗脱7分左右出的峰不好，梯度洗脱7分的锋出在坡上啊怎么办？
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wangdejuan

银虫 (初入文坛)

[求助] 等度洗脱7分左右出的峰不好，梯度洗脱7分的锋出在坡上啊怎么办？

Caco-2实验得到的样品分析流动相：甲醇：磷酸缓冲盐为25:75，等度洗脱时6分左右出现的锋不好，梯度洗脱：初始比例洗脱至5分时换成35:65,出峰时间在7分左右，但出在山坡上，怎么办？
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1楼 2011-11-15 11:14:25
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tiger555z

银虫 (小有名气)
★
karl2100(金币+1): 谢谢回帖！ 2011-11-19 00:31:52
不知道楼主的6分多，7分钟的峰是不是一个物质，因为条件变化了。
既然化合物被细胞代谢过了，代谢物肯定极性增加，出峰比原形化合物快的。
我觉得楼主可以把初始梯度比例调整的小一些，比如以10%甲醇或15%甲醇开始梯度。再者，走梯度是要不断变化流动相组成的，楼主在0-5分钟的流动相组成没有变化，在5分钟的时刻突然将组成变化为35%甲醇，这肯定会再图谱中显示出台阶的，好像很少遇到这种突然变化的梯度，HPLC的话，1分钟增加5%的有机相组成都已经比较快了，何况瞬时将比例增加10%呢？
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8楼2011-11-18 17:01:52
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tiger555z

银虫 (小有名气)
没看到梯度表，不好分析。
不知道是不是上一针梯度有东西没洗出来带到这一针的，或者梯度没平衡好，不知道你梯度洗脱进了几针，发的图谱又是第几针的，我想应该给出空白梯度的图谱吧？
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2楼2011-11-17 17:08:45
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wangdejuan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tiger555z at 2011-11-17 17:08:45:
没看到梯度表，不好分析。
不知道是不是上一针梯度有东西没洗出来带到这一针的，或者梯度没平衡好，不知道你梯度洗脱进了几针，发的图谱又是第几针的，我想应该给出空白梯度的图谱吧？

平衡了20分钟，基线很平了才进的针
第一张图是等度的甲醇：缓冲液25:75
第二张图是梯度的
0-5分      25:75
5-30分   35:65
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3楼2011-11-18 09:35:34
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tiger555z

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wangdejuan(金币+3): 那7分的锋就不是等度时6分多那个峰了对吗？因为样品是细胞代谢过的，不清楚会出几个峰，应该在那个时间出峰，有什么好方法吗？ 2011-11-18 14:00:43
1.怀疑你的梯度基本没有生效，等度时25%甲醇6分多出峰，梯度7分出峰，基本没有太大改变。因为35%的梯度比例从泵头到流出色谱柱需要有一小段时间（死时间t0）。你在0-5分钟走25%甲醇，化合物已经在色谱柱中冲洗了一段时间了，等你在5分钟改变梯度时，化合物差不多都被洗脱出来了。
2.你在5分钟的时刻把甲醇从25%立即过渡到35%，这样也是会出台阶的。(因为甲醇虽然吸收很小，但也是有吸收的，尤其是在低波长)。而你的化合物差不多就是在这段时间出峰，当然会出在台阶上了。
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4楼2011-11-18 12:31:23
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