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wangdejuan

银虫 (初入文坛)

[求助] 等度洗脱7分左右出的峰不好,梯度洗脱7分的锋出在坡上啊怎么办?

Caco-2实验得到的样品分析流动相:甲醇:磷酸缓冲盐为25:75,等度洗脱时6分左右出现的锋不好,梯度洗脱:初始比例洗脱至5分时换成35:65,出峰时间在7分左右,但出在山坡上,怎么办?
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tiger555z

银虫 (小有名气)


karl2100(金币+1): 谢谢回帖! 2011-11-19 00:31:52
不知道楼主的6分多,7分钟的峰是不是一个物质,因为条件变化了。
既然化合物被细胞代谢过了,代谢物肯定极性增加,出峰比原形化合物快的。
我觉得楼主可以把初始梯度比例调整的小一些,比如以10%甲醇或15%甲醇开始梯度。再者,走梯度是要不断变化流动相组成的,楼主在0-5分钟的流动相组成没有变化,在5分钟的时刻突然将组成变化为35%甲醇,这肯定会再图谱中显示出台阶的,好像很少遇到这种突然变化的梯度,HPLC的话,1分钟增加5%的有机相组成都已经比较快了,何况瞬时将比例增加10%呢?
8楼2011-11-18 17:01:52
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tiger555z

银虫 (小有名气)

没看到梯度表,不好分析。
不知道是不是上一针梯度有东西没洗出来带到这一针的,或者梯度没平衡好,不知道你梯度洗脱进了几针,发的图谱又是第几针的,我想应该给出空白梯度的图谱吧?
2楼2011-11-17 17:08:45
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wangdejuan

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tiger555z at 2011-11-17 17:08:45:
没看到梯度表,不好分析。
不知道是不是上一针梯度有东西没洗出来带到这一针的,或者梯度没平衡好,不知道你梯度洗脱进了几针,发的图谱又是第几针的,我想应该给出空白梯度的图谱吧?

平衡了20分钟,基线很平了才进的针
第一张图是等度的甲醇:缓冲液25:75
第二张图是梯度的
0-5分      25:75
5-30分   35:65
3楼2011-11-18 09:35:34
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tiger555z

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wangdejuan(金币+3): 那7分的锋就不是等度时6分多那个峰了对吗?因为样品是细胞代谢过的,不清楚会出几个峰,应该在那个时间出峰,有什么好方法吗? 2011-11-18 14:00:43
1.怀疑你的梯度基本没有生效,等度时25%甲醇6分多出峰,梯度7分出峰,基本没有太大改变。因为35%的梯度比例从泵头到流出色谱柱需要有一小段时间(死时间t0)。你在0-5分钟走25%甲醇,化合物已经在色谱柱中冲洗了一段时间了,等你在5分钟改变梯度时,化合物差不多都被洗脱出来了。
2.你在5分钟的时刻把甲醇从25%立即过渡到35%,这样也是会出台阶的。(因为甲醇虽然吸收很小,但也是有吸收的,尤其是在低波长)。而你的化合物差不多就是在这段时间出峰,当然会出在台阶上了。
4楼2011-11-18 12:31:23
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