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wangdejuan银虫 (初入文坛)
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等度洗脱7分左右出的峰不好，梯度洗脱7分的锋出在坡上啊怎么办？
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| Caco-2实验得到的样品分析流动相：甲醇：磷酸缓冲盐为25:75，等度洗脱时6分左右出现的锋不好，梯度洗脱：初始比例洗脱至5分时换成35:65,出峰时间在7分左右，但出在山坡上，怎么办？ |
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wangdejuan
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【答案】应助回帖
wangdejuan(金币+3): 那7分的锋就不是等度时6分多那个峰了对吗？因为样品是细胞代谢过的，不清楚会出几个峰，应该在那个时间出峰，有什么好方法吗？ 2011-11-18 14:00:43
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1.怀疑你的梯度基本没有生效，等度时25%甲醇6分多出峰，梯度7分出峰，基本没有太大改变。因为35%的梯度比例从泵头到流出色谱柱需要有一小段时间（死时间t0）。你在0-5分钟走25%甲醇，化合物已经在色谱柱中冲洗了一段时间了，等你在5分钟改变梯度时，化合物差不多都被洗脱出来了。 2.你在5分钟的时刻把甲醇从25%立即过渡到35%，这样也是会出台阶的。(因为甲醇虽然吸收很小，但也是有吸收的，尤其是在低波长)。而你的化合物差不多就是在这段时间出峰，当然会出在台阶上了。 |
4楼2011-11-18 12:31:23
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5楼2011-11-18 12:33:37
50