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hoechst 33342/PI双染在贴壁细胞的操作
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| 请各位虫友给我说一下hoechst 33342/PI双染在贴壁细胞的操作步骤！急呀！我实验室有凯基hoechst 33342/PI双染的试剂盒，但是说是要胰酶消化？贴壁细胞还要消化才能染？请各位帮忙！谢谢！ |
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yang0071
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【答案】应助回帖
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amisking(金币+5): 鼓励积极应助！ 2011-11-12 19:15:27
baddog(金币+10): 2011-11-13 18:39:52
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1） 处理盖玻片 将盖玻片用2 M NaOH 浸泡2h，洗净后置于70％乙醇中备用； 2） 细胞培养 从70％乙醇中取出盖玻片，晾干；将盖玻片放入6 孔板中，分适量细胞于其上，使单层细胞铺至60％培养面积； 3） 固定 弃去培养液，用PBS 洗涤盖玻片，加入2 ml 4％多聚甲醛室温静置约30 min；PBS 洗涤，10 min×3 次，缓摇（若细胞贴壁能力差，则静置洗涤，下同）； 4） 透化 吸干PBS，加入含0.2％Triton X-100、1%BSA 的PBS 约1 ml；冰上静置5 min；PBS 洗涤，10 min×3 次； 5） 封闭 吸干PBS，于六孔板相应孔中加入1 ml 含1％BSA 的PBS，室温封闭1 h；PBS 洗涤，10 min×3 次； 6）染色 用Hoechst 33258(20ug/ml)染色15分钟，避光。 7） 计数活细胞 取下盖玻片，放入细胞培养板相应孔中，PBS 洗涤，10 min×3 次；取载玻片，滴少量10％甘油（约50 ul），将盖玻片细胞面朝下放在载玻片上；计数活细胞。 |
2楼2011-11-12 17:35:29
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