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happyxiaoli铜虫 (小有名气)
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大鼠气管上皮细胞培养方法 已有1人参与
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我最近做大鼠气管上皮细胞原代培养，用酶消化法，用了好几种没消化，得到的细胞数都特别少。 我的方法是：取大鼠2只，麻醉后，在无菌条件下取气管，用冷的PBS液冲洗，分离除去其他粘膜组织，再用PBS（含青-链双抗）液冲洗3遍，结扎一端，灌入0.25%胰酶，结扎另一端，4度，冰箱过夜。剪开结扎线，加入10%的小牛血清的DMEM培养液终止消化。将液体转移置于10ml离心管中，1000r/min,10min.培养液冲洗重复一次，加培养液吹达成细胞悬液，计数，发现，细胞的数量特别少。做了好几次都是一样的结果，我还试了0.25%中性蛋白酶，结果差不多。 现在找不出原因，请师哥师姐，朋友们帮帮忙，帮我分析一下，非常感谢！！！急！急！急！ |
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【答案】应助回帖
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wanhscn(金币+5): good!对楼主有帮助!破格授予一个专家指数,再接再厉! 2011-11-12 10:09:12
wanhscn(MolEPI+1): 2011-11-12 10:09:33
wanhscn(金币+5): good!对楼主有帮助!破格授予一个专家指数,再接再厉! 2011-11-12 10:09:12
wanhscn(MolEPI+1): 2011-11-12 10:09:33
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我做的是关节滑膜细胞，我看你写的方法，好像在消化的整个过程中没有进行吹打，每10分钟左右对其吹打一次，效果应该会好点。消化完成后，我先先在显微镜下观察，会有较多细胞，但离心后，也出现减少，所以我不建议离心，直接将所有东西转移至培养瓶培养。4度情况下，胰酶几乎没有活力，过夜来说，也没多少细胞，文献上的很多都是“牛人”，他们的实验要重复出来很难，仅供参考 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
6楼2011-11-12 03:59:34
2楼2011-11-10 08:43:47
happyxiaoli
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3楼2011-11-10 13:45:24
happyxiaoli
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4楼2011-11-10 13:50:13
