应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大鼠气管上皮细胞培养方法
51/1返回列表
查看: 2427  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)

[求助] 大鼠气管上皮细胞培养方法 已有1人参与

我最近做大鼠气管上皮细胞原代培养，用酶消化法，用了好几种没消化，得到的细胞数都特别少。
   我的方法是：取大鼠2只，麻醉后，在无菌条件下取气管，用冷的PBS液冲洗，分离除去其他粘膜组织，再用PBS（含青-链双抗）液冲洗3遍，结扎一端，灌入0.25%胰酶，结扎另一端，4度，冰箱过夜。剪开结扎线，加入10%的小牛血清的DMEM培养液终止消化。将液体转移置于10ml离心管中，1000r/min,10min.培养液冲洗重复一次，加培养液吹达成细胞悬液，计数，发现，细胞的数量特别少。做了好几次都是一样的结果，我还试了0.25%中性蛋白酶，结果差不多。
    现在找不出原因，请师哥师姐，朋友们帮帮忙，帮我分析一下，非常感谢！！！急！急！急！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
读书需用意，一字值千金！
1楼 2011-11-09 11:09:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)
再就是我看的文献还有参考书做气管的多数是往气管里灌酶（分离细胞培养法），按理说低温消化，酶活性低，但时间也是长呀，这样可以降低上皮细胞的受损程度，结果还是不理想.我现在是特别着急，请各位做过的，或是有相关经验朋友帮帮忙，多多指教，在这先谢谢各位了！！！
赞一下 回复此楼
读书需用意，一字值千金！
4楼2011-11-10 13:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

guifang

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good!鼓励分享! 2011-11-10 21:26:33
我个人感觉是温度的问题，胰蛋白酶在4℃的活性，几乎可以忽略不计了。我原来做原代细胞的时候，是将组织剪碎，然后加入胰蛋白酶，放入37℃培养箱中培养30min，然后加培养基终止消化，放入培养箱中培养，最好前面几天不要去移动细胞。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-11-10 08:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 可以在某回帖者的右下点 引用回复 这样该回帖者才会收到! 2011-11-11 21:48:16
谢谢上面的朋友，您做的也是气管上皮细胞吗?您说的温度问题，我也试过把气管剪碎了，加酶，37度消化，最后消化的组织成丝状物了，黏黏的聚在一起，感觉消化不动了，把消化液离心1000r/min,10min，观察，结果还是没有多少细胞，不知道细胞都哪去了。
赞一下(1人) 回复此楼
读书需用意，一字值千金！
3楼2011-11-10 13:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyxiaoli

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by guifang at 2011-11-10 08:43:47:
我个人感觉是温度的问题，胰蛋白酶在4℃的活性，几乎可以忽略不计了。我原来做原代细胞的时候，是将组织剪碎，然后加入胰蛋白酶，放入37℃培养箱中培养30min，然后加培养基终止消化，放入培养箱中培养，最好前面几 ...

谢谢上面的朋友，您做的也是气管上皮细胞吗?您说的温度问题，我也试过把气管剪碎了，加酶，37度消化，最后消化的组织成丝状物了，黏黏的聚在一起，感觉消化不动了，把消化液离心1000r/min,10min，观察，结果还是没有多少细胞，不知道细胞都哪去了。
赞一下 回复此楼
读书需用意，一字值千金！
5楼2011-11-11 23:24:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 初试 317 +4 半拉月丙 2026-03-20 4/200 2026-03-21 16:41 by macy2011
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 354求调剂 +5 Tyoumou 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:35 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭