应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物多样性研究的几个问题
51/1返回列表
查看: 2980  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

范慧

新虫 (初入文坛)

[求助] 微生物多样性研究的几个问题

1.所有的引物p出来的序列都可以建系统发育树吗
2.什么引物p出来的序列可用于建立基因文库啊    建立基因文库怎样分析哪种是优势菌群
3.连接转化选择阳性克隆进行扩增的步骤是什么
谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-25 17:26:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5, MicEPI+1): 不错，鼓励新虫，加油哦^_^ 2011-11-09 09:05:28
楼主，您好。关于您的问题我有一些见解，建库有很多种,可以建细菌全基因组文库，也可以建某功能基因文库，还可以建16S文库等......您应该是想建16S文库做微生物分子生态吧！如果是统计多样性，研究群落结构，进化地位和优势种群，建议答案如下：
1），16s适合做系统发育树，研究其进化地位，扩16S全长建议引物27F,1492R.(退火52度，延伸1分30秒)。
2），下面两个问题其实是一个答案：扩出16S后，酶连至PMD19-T载体，转化（导入感受态大肠杆菌种），再用蓝白斑筛选（涂菌至含X-GEL和AMP的平板），挑取白斑（阳性）同时转板，用M13扩增做菌落PCR,酶切分型跑PAGE胶，分型后，挑取代表克隆子测序构建进化树。
赞一下(2人) 回复此楼
NOPAIN,NOGAIN!
4楼2011-11-09 00:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

zhaoyu2881

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 鼓励回帖交流 2011-11-08 17:06:41
我只能回答一下第一个问题，其余的两个没有做过，也不清楚。
一般来说，鉴定细菌常用16SrDNA 来构建系统发育树，如果想要进一步明确分类地位，可以基于一些持家基因来构建发育树，然后综合考虑其分类归属。
赞一下(1人) 回复此楼
Thatislife,onlylifehurts.
2楼2011-11-08 16:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niyq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
zhang8826857(金币+2): good 2011-11-09 09:05:01
1.16s、持家基因都可建树，关键数据库中要有先进序列
2.第二个问题前面和第一个问题一样，关键是你p出来的基因别人也研究过，有较多的相近序列，构建文库后测序，你才能比对，否则自己跟自己比吧，所以要选对基因，你要研究那类微生物，批出来克隆了，测序了或者酶切完了，统计相同的序列，你就知道哪些是优势菌了
3.选择载体上的链接位点两侧的序列就可以直接用大肠杆菌煮沸液做模板扩增
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-09 00:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

candice_fly

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+6): 鼓励新虫+热心应助奖励 2011-11-14 15:56:29
引用回帖:
4楼: Originally posted by pcl-bunny at 2011-11-09 00:58:27:
楼主，您好。关于您的问题我有一些见解，建库有很多种,可以建细菌全基因组文库，也可以建某功能基因文库，还可以建16S文库等......您应该是想建16S文库做微生物分子生态吧！如果是统计多样性，研究群落结构，进化 ...

看了你的回帖，我说一下我的实验，希望你能指导一下。
我就是用的27F和1492R，我做了一次温度梯度，52度的条带没出，46度的还行，没有特异性。你做连接是跑电泳回收的片段，还是PCR扩出来的直接做连接？我连接了PMD-18，直接涂的AMP平板，菌落长的不多，可能没弄好，是不是用PMD-19比较好？
后面的  再用蓝白斑筛选（涂菌至含X-GEL和AMP的平板），挑取白斑（阳性）同时转板，用M13扩增做菌落PCR,酶切分型跑PAGE胶，分型后，挑取代表克隆子测序构建进化树。 能在详细说下么 ？谢谢了
酶切就是分出的条带不一样，然后在挑取群落的菌送测么？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-11-14 12:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂 +7 代fish 2026-04-09 7/350 2026-04-09 14:39 by only周
[考研] 初试分332，一志愿报考西北工业大学， +6 故人?? 2026-04-09 6/300 2026-04-09 14:16 by limeifeng
[考研] 367求调剂 +3 hffQAQ 2026-04-09 3/150 2026-04-09 13:13 by gong120082
[考研] 070300化学279求调剂 +17 哈哈哈^_^ 2026-04-08 18/900 2026-04-09 10:49 by 三七七想上岸
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 一志愿211，0703化学305分求调剂 +20 严西西戏 2026-04-06 26/1300 2026-04-08 22:12 by 凯凯要变帅
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 求调剂 +9 月@163.com 2026-04-07 11/550 2026-04-08 14:48 by qlm5820
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 312求调剂 +18 gtw1 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 18:16 by 蓝云思雨
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-05 4/200 2026-04-06 12:29 by 中飞院空管学院�
[考研] 生物学求调剂 +5 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-06 11:56 by lijunpoly
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-04 20:37 by 蓝云思雨
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭