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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 微生物多样性研究的几个问题
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pcl-bunny

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5, MicEPI+1): 不错，鼓励新虫，加油哦^_^ 2011-11-09 09:05:28
楼主，您好。关于您的问题我有一些见解，建库有很多种,可以建细菌全基因组文库，也可以建某功能基因文库，还可以建16S文库等......您应该是想建16S文库做微生物分子生态吧！如果是统计多样性，研究群落结构，进化地位和优势种群，建议答案如下：
1），16s适合做系统发育树，研究其进化地位，扩16S全长建议引物27F,1492R.(退火52度，延伸1分30秒)。
2），下面两个问题其实是一个答案：扩出16S后，酶连至PMD19-T载体，转化（导入感受态大肠杆菌种），再用蓝白斑筛选（涂菌至含X-GEL和AMP的平板），挑取白斑（阳性）同时转板，用M13扩增做菌落PCR,酶切分型跑PAGE胶，分型后，挑取代表克隆子测序构建进化树。
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NOPAIN,NOGAIN!
4楼2011-11-09 00:58:27
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