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2140061

铜虫 (小有名气)

[求助] pet30a怎么构建C端His-tagged的载体啊？

pet30a载体在MCS两端都有His-tagged，怎么构建讲目的蛋白只在C端His-tagged的载体啊？
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1楼 2011-10-20 18:46:01
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loganfan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

选择正确的酶切位点就可以了，使自己的目的基因插入质粒后，后面紧随6个HIS
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7楼2011-10-22 18:51:38
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

2140061(金币+8): 谢谢你的回复，请问如果C端没终止子密码子，是不是就是两端都有His-tagged？ 2011-10-21 22:37:19
双酶切做连接时5‘端选用Nde I酶切位点，这样N端的His-taq就能切掉。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-10-21 08:51:48
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

然后3’端设计引物时记得将基因的终止密码子突变掉。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-10-21 09:16:28
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2140061

铜虫 (小有名气)
谢谢楼上回复，请问如果C端没终止子密码子，是不是就是两端都有His-tagged？
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5楼2011-10-21 22:38:02
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