应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pet30a怎么构建C端His-tagged的载体啊？
91/1返回列表
查看: 2490  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

2140061

铜虫 (小有名气)

[求助] pet30a怎么构建C端His-tagged的载体啊？

pet30a载体在MCS两端都有His-tagged，怎么构建讲目的蛋白只在C端His-tagged的载体啊？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-20 18:46:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

2140061(金币+8): 谢谢你的回复，请问如果C端没终止子密码子，是不是就是两端都有His-tagged？ 2011-10-21 22:37:19
双酶切做连接时5‘端选用Nde I酶切位点，这样N端的His-taq就能切掉。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-10-21 08:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)
楼上正解
回复此楼
3楼2011-10-21 08:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

然后3’端设计引物时记得将基因的终止密码子突变掉。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
4楼2011-10-21 09:16:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2140061

铜虫 (小有名气)
谢谢楼上回复，请问如果C端没终止子密码子，是不是就是两端都有His-tagged？
赞一下 回复此楼
5楼2011-10-21 22:38:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！等待楼主回复后，给与专家指数！ 2011-10-22 10:04:52
wanhscn(金币+3, MolEPI+1): 根据 2011-10-22 23:50:44
wanhscn: 根据楼主反馈,给与专家指数!Good! 2011-10-22 23:51:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2140061 at 2011-10-21 22:38:02:
谢谢楼上回复，请问如果C端没终止子密码子，是不是就是两端都有His-tagged？

不是的，你不是只需要C端由his-taq吗？那么连接的时候，上游引物引物引入Nde I酶切位点，这样就可以切掉N端的his-taq。然后下游引物设计的时候需要突变掉终止密码子，这样C端才能保留his-taq，不然基因表达到his-taq之前就终止了。
我觉得你需要把PET30a质粒的物理图谱好好看看。应该可以看懂的。
赞一下(3人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
6楼2011-10-22 09:59:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loganfan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

选择正确的酶切位点就可以了，使自己的目的基因插入质粒后，后面紧随6个HIS
赞一下 回复此楼
7楼2011-10-22 18:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2140061

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by susizheng at 2011-10-22 09:59:53:
不是的，你不是只需要C端由his-taq吗？那么连接的时候，上游引物引物引入Nde I酶切位点，这样就可以切掉N端的his-taq。然后下游引物设计的时候需要突变掉终止密码子，这样C端才能保留his-taq，不然基因表达到his ...

我看懂了,如果我想做C端的his-tagged的话,怎么构建我已经看懂了。
我的另外一个问题是，如果N端，我不用Nde I酶切掉，而且C端我也不加终止密码子，是不是就是N、C端都带有His-tagged？谢谢哈
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-22 21:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
楼: Originally posted by 2140061 at 2011-10-22 21:55:50:
我看懂了,如果我想做C端的his-tagged的话,怎么构建我已经看懂了。
我的另外一个问题是，如果N端，我不用Nde I酶切掉，而且C端我也不加终止密码子，是不是就是N、C端都带有His-tagged？谢谢哈

是的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
Thank-you，so-blue.
9楼2011-10-22 23:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2140061 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 江苏大学 工科调剂 捡漏 +3 Evan_Liu 2026-04-09 4/200 2026-04-09 22:52 by yang婷
[考研] 297求调剂 +22 ljy20040718！ 2026-04-03 24/1200 2026-04-09 20:48 by yanenwang
[考研] 085601初试330分找调剂 +8 流心奶黄包l 2026-04-09 8/400 2026-04-09 19:19 by 5268321
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-04 15/750 2026-04-08 22:52 by 猪会飞
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 285求调剂 +12 AZMK 2026-04-05 18/900 2026-04-08 20:43 by 逆水乘风
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 363求调剂 +9 zh096 2026-04-04 9/450 2026-04-07 21:51 by 418490947
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 工科求调剂 +15 11ggg 2026-04-03 15/750 2026-04-05 16:24 by zzx2138
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +4 zhouzhen654 2026-04-03 4/200 2026-04-04 18:10 by 猪会飞
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭