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muxiachuixue

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC 样品咋被冲下来了?

如题,小弟最近用分析HPLC来制备,10mg样品溶解到0.4ml的流动相(55%甲醇:45%水)里,每次进针15uL,主峰在15min左右出峰,但2~5min会出现很高的杂峰(和主峰差不多高),我把这些杂峰收集(未浓缩),进样发现有主峰!难道是样品直接被冲下来了?如何避免?(如果是进样量太大,那为何第二张图2~5min还是有不规则的杂峰?)

样品进样



杂峰收集进样
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以无法为有法,以无限为有限
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2011-10-17 17:04:17:
只要你制备柱和分析柱填料是一个型号的就可以,分离能力类似也行~流速和进样量都是分析条件直接线性放大计算的。制备柱的效率一针赶上你这15微升进一天的制备量了~,况且你还可以切峰~

制备柱填料粒径比分析柱大多了吧?那是不是分离效果比分析柱差很多?根据你的经验,你认为我的样品在分析柱上分成这个效果,用制备或者半制备能分开么?
以无法为有法,以无限为有限
10楼2011-10-17 17:47:11
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yukepotato

金虫 (正式写手)

美猴王

【答案】应助回帖

你收集的主产品有没有单独走过啊,看看呢!
永远不要带着问题去找你的上司!
2楼2011-10-17 09:30:02
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jianhuilcn

金虫 (正式写手)


恩,我以前也这样做过制备,总会有类似的问题发生,看看有没高人解答下
3楼2011-10-17 09:42:57
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wchao612

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

muxiachuixue(金币+2): 2011-10-17 15:08:44
仔细看了你的图后,我认为你分析的有偏差!
1 前5分钟的可以视为溶剂峰,
2 你制备可能没有问题,但是你说的制备的前5分钟内有主峰是错误的,因为第一张图主峰响应值为1600mv,而第二张图是8mv,考虑很有可能是你没有洗针洗干净。
3 你好好对比下,第二张图和第一张图实际上是一模一样的,包括前五分钟也都是。
4所以,很有可能就是溶剂峰就那样,至于是不是这样,进一针溶媒即可!

但,绝对不可能前面出现的东西,制备后却在后面出现,不可能的!
4楼2011-10-17 14:45:50
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