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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 样品咋被冲下来了？
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC 样品咋被冲下来了？

如题，小弟最近用分析HPLC来制备，10mg样品溶解到0.4ml的流动相（55%甲醇：45%水）里，每次进针15uL，主峰在15min左右出峰，但2~5min会出现很高的杂峰（和主峰差不多高），我把这些杂峰收集（未浓缩），进样发现有主峰！难道是样品直接被冲下来了？如何避免？（如果是进样量太大，那为何第二张图2~5min还是有不规则的杂峰？）

样品进样



杂峰收集进样
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1楼2011-10-17 09:01:54
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by yukepotato at 2011-10-17 09:30:02:
你收集的主产品有没有单独走过啊，看看呢！

主产品走过，是纯的
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5楼2011-10-17 15:01:38
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by wchao612 at 2011-10-17 14:45:50:
仔细看了你的图后，我认为你分析的有偏差！
1 前5分钟的可以视为溶剂峰，
2 你制备可能没有问题，但是你说的制备的前5分钟内有主峰是错误的，因为第一张图主峰响应值为1600mv，而第二张图是8mv，考虑很有可能是 ...

感谢你的解答：
1.关于溶剂峰：我进过纯水、纯甲醇、流动相，2~5min会有不大于1mUA的波动，绝对不会出现第一张图里面快1000的杂峰。
2.第二张图是我收集了第一张图2~5min的杂峰（10ml），是从10ml里面取15uL进样的，相当于稀释了很多倍，所以第二张图的主峰只有10mUA左右，而且我进样之前都用甲醇冲洗过进样口，也洗针了。
3.我将2~5min的杂峰收集之后浓缩，是红色的，和样品颜色一致，称重8.8mg，而原来样品是10mg，相当于8.8mg被冲下来了，只有1.2mg保留在柱子是
我也很难理解为什么会被冲下来而后面还正常出峰。。。但事实就是这样。。。求解答，快疯了
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6楼2011-10-17 15:08:33
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muxiachuixue

木虫 (正式写手)
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7楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2011-10-17 15:55:42:
感觉进样量大了~过载，造成有部分没有保留住，另外觉得用制备液相做就不会，制备柱粗，上样量大

那用制备液相或者半制备液相能分开吗？我现在在分析柱上能把两个峰分到峰尾相接
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8楼2011-10-17 16:02:18
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木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2011-10-17 17:04:17:
只要你制备柱和分析柱填料是一个型号的就可以，分离能力类似也行~流速和进样量都是分析条件直接线性放大计算的。制备柱的效率一针赶上你这15微升进一天的制备量了~，况且你还可以切峰~

制备柱填料粒径比分析柱大多了吧？那是不是分离效果比分析柱差很多？根据你的经验，你认为我的样品在分析柱上分成这个效果，用制备或者半制备能分开么？
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10楼2011-10-17 17:47:11
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木虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by 乙酰水杨酸 at 2011-10-17 17:48:56:
可以的，分析上这么大的浓度你都已经实现基线分离了，制备上当然也可以，只要填料类型一样就行。

但是制备柱效低很多啊，填料一样不代表柱效一样啊
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12楼2011-10-17 21:04:16
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13楼: Originally posted by lanpishu23 at 2011-10-17 23:31:06:
首先你做样前得充分平衡柱子，第二感觉你进样体积过大导致这样的结果，你可以把样品再浓一点，进样体积小一点看看，进2ui

我定量环20uL啊，我进5uL（约30ug）的时候死时间也有样品被冲下来
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14楼2011-10-18 00:32:49
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19楼: Originally posted by kitaro at 2011-10-18 11:39:43:
30ug很夸张了，一般小柱子不超过2ug吧

没办法，用分析柱来制备只能这么干啊
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20楼2011-10-18 12:40:56
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15楼: Originally posted by mouse103 at 2011-10-18 10:02:07:
常理无法解释，我觉得你该考虑几点：1.柱子是否完好；2.是否存在酸碱的调和。

柱子是新柱子，用了不到一个月，进其他样品的时候是正常的，前面也没有那些杂峰，水里面有0.1%的甲酸，溶解样品的是流动相
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21楼2011-10-18 12:44:21
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16楼: Originally posted by kele9955 at 2011-10-18 10:28:22:
考虑一下加大水的比例溶解样品再次上样

纯水溶解样品进过，死时间有明显的杂峰
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22楼2011-10-18 12:45:06
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