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grandstone

铁虫 (小有名气)

[求助] 电化学分析中的HRP酶和过氧化氢系统该怎样测试?

刚开始做,为了检测小分子物质。首先在电极上包被偶联抗原,再加一抗,再加HRP标记的二抗,放入缓冲液中后,再加入过氧化氢。目前有几个问题想请教下高手:
1.缓冲液目前使用的是 pH 7.0 的0.01mol PBS,这个需要调整吗,还是一般都用这个?
2.用循环伏安法测试缓冲液背景电流的时候老是溢出,调整灵敏度也不行,目前只能用差式脉冲来测,这个是为什么呢?
3.把按照之前处理的电极放入缓冲液中后,再加入过氧化氢 ,15分钟后测定,差式脉冲曲线和没有加入过氧化氢之前没有什么差异(-0.5——+0.8),这是为什么呢?

谢谢各位啦!
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yuanling123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

3.把按照之前处理的电极放入缓冲液中后,再加入过氧化氢 ,15分钟后测定,差式脉冲曲线和没有加入过氧化氢之前没有什么差异(-0.5——+0.8),这是为什么呢?
还要加入电子媒介体,如硫堇或对二苯酚
希望结识电化学方面的人才!
3楼2011-10-21 15:38:59
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zbyymlx998

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我想说一下,第一,你确定你的物质已经修饰好了吗?或是说你确实你修饰上你的抗原或是抗体了吗?如果,你没有接上二抗,所以,你当然加入过氧化氢后没有响应了。所以,这是第三个的问题。还有一班都加电话性物质,你加了吗?我做这个体系用的是计时电流法。然后,对于第一个问题,我感觉PBS应该是可以的。
对于第二个问题,我暂时不是太清楚,在PBS里面做CV图,我的是有响应的,但是电流很小
2楼2011-10-20 18:01:58
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