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TCA/丙酮沉淀,蛋白为什么不溶呢??
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hrjxx
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TCA/丙酮沉淀,蛋白为什么不溶呢??
大家好,我用0.2%DTT,10%TCA的丙酮溶液沉淀蛋白后,为什么蛋白就是不溶呢??一直是离心后的那种块状,不能被溶解开啊,大家知道是什么原因吗??我的裂解液成分是:9M尿素,1%DTT,4%CHAPS,0.2%CA,沉淀后干燥12分钟,室温溶解了6个小时候,还是块状,大家指教下啊!
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1楼
2011-10-16 02:32:13
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爱海儿
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9楼
:
Originally posted by
dllsir
at 2011-10-20 21:44:33
有谁跑过植物(或蓝藻)的总膜蛋白没,我提取总膜后,用普通的SDS上样缓冲液制样,跑出的带很少,而且里面含有很多色素,不知道如何去除里面的色素,还有上清TCA沉淀后跑出的条带还没有直接制样跑出的效果好?
亲 你有没有找到去除蓝藻色素的方法啊 TCA丙酮沉淀后还没有直接制样跑出来的效果好么?
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14楼
2014-07-05 10:57:15
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hf2016
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wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-16 10:53:05
hrjxx(金币+2): 谢谢啊 ,你们一般干燥多长时间啊 ?? 2011-10-16 16:57:50
干燥时间太长,一般干燥是沉淀为半透明状就可以了
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一切开始于结束之后
2楼
2011-10-16 07:29:43
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蕾雷
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wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-16 10:52:46
hrjxx(金币+2): 谢谢啊,离心转速低了,会不会蛋白沉淀不完全啊 ? 2011-10-16 16:59:36
丙酮沉淀完 离心的转速不要太高 离心的时间不要太长 能把上清去除就行,干燥的时候 注意不要时间很长 另外 你的裂解液 可以放2m 硫脲
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3楼
2011-10-16 09:06:24
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hrjxx
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3楼
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Originally posted by
蕾雷
at 2011-10-16 09:06:24:
丙酮沉淀完 离心的转速不要太高 离心的时间不要太长 能把上清去除就行,干燥的时候 注意不要时间很长 另外 你的裂解液 可以放2m 硫脲
伯乐说明上,推荐我们的是35000G了 ,别的好像都是小于20000G的
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4楼
2011-10-16 20:00:19
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