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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带
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小翠迪

木虫 (小有名气)

[求助] 求助：为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带

我是先用限制性酶切酶将质粒线性化，然后电泳，结果显示为单一目的条带，可是在用乙醇沉淀法回收之后，再做电泳，发现都没有单一条带，呈弥散状，请各位高手帮我看看是什么原因啊！
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1楼 2011-10-10 23:24:08
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小翠迪

木虫 (小有名气)
中间的是环状对照
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2楼2011-10-10 23:24:41
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小翠迪(金币+10): 还是不知道问题在哪儿， 不过还是谢谢啦 2011-10-11 17:46:30
与溶剂有关。或杂质没有除干净
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3楼2011-10-11 00:14:43
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-10-11 14:13:59
既然本来是单一一条带，醇沉回收不是，那就是试剂或操作问题了，自己重新在仔细做一次吧
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小翠迪
显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-10-11 00:20:32
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小翠迪

木虫 (小有名气)
我重复做了好几次了，都是这样，醇沉的步骤也挺简单的啊，不知道问题在哪儿。试剂的话，乙醇用了进口的sigma，乙酸钠是自己配制的，后来测了下PH，是5.1，是乙酸钠的原因吗？
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5楼2011-10-11 09:38:44
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小翠迪

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 00:20:32:
既然本来是单一一条带，醇沉回收不是，那就是试剂或操作问题了，自己重新在仔细做一次吧

不知道为什么没办法给你加金币了，虽然还没找出确切原因，也谢谢啦
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6楼2011-10-11 17:52:21
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asznpb

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小翠迪 at 2011-10-11 17:52:21:
不知道为什么没办法给你加金币了，虽然还没找出确切原因，也谢谢啦

呵呵，挺好的，回复你另外一个问题:质粒提取后的电泳最常见的就是3条带，分别是超螺旋，线性，解旋，所以可能是30min的时候本身就没切开，半个小时后目的条带切开了部分，但是没完全切好吧……你再多切一会可能还会有变化，既然这东西你搞不清就直接拿去测序就好了
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小翠迪
显微镜下的世界很精彩！
7楼2011-10-11 19:33:26
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小翠迪

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 19:33:26:
呵呵，挺好的，回复你另外一个问题:质粒提取后的电泳最常见的就是3条带，分别是超螺旋，线性，解旋，所以可能是30min的时候本身就没切开，半个小时后目的条带切开了部分，但是没完全切好吧……你再多切一会可能 ...

哦，出现3条带是这个原因啊，明白了嘿嘿。测序结果显示质粒是没问题的，就是现在想再做下酶切，弄张漂亮的图片将来有用，没想到出现这样的问题。
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8楼2011-10-11 21:05:29
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wangds

金虫 (正式写手)
回收为什么不用胶回收试剂盒？
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9楼2011-10-11 21:40:40
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小翠迪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangds at 2011-10-11 21:40:40:
回收为什么不用胶回收试剂盒？

就是文献里面看很多人用的是这个办法，而且步骤比较简单，就先用的这个
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10楼2011-10-11 22:27:45
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