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小翠迪

木虫 (小有名气)

[求助] 求助:为什么线性化的质粒回收之后电泳结果不是一条带

我是先用限制性酶切酶将质粒线性化,然后电泳,结果显示为单一目的条带,可是在用乙醇沉淀法回收之后,再做电泳,发现都没有单一条带,呈弥散状,请各位高手帮我看看是什么原因啊!
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小翠迪

木虫 (小有名气)

中间的是环状对照
2楼2011-10-10 23:24:41
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怎么都行

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小翠迪(金币+10): 还是不知道问题在哪儿, 不过还是谢谢啦 2011-10-11 17:46:30
与溶剂有关。或杂质没有除干净
3楼2011-10-11 00:14:43
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-10-11 14:13:59
既然本来是单一一条带,醇沉回收不是,那就是试剂或操作问题了,自己重新在仔细做一次吧

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

显微镜下的世界很精彩!
4楼2011-10-11 00:20:32
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小翠迪

木虫 (小有名气)

我重复做了好几次了,都是这样,醇沉的步骤也挺简单的啊,不知道问题在哪儿。试剂的话,乙醇用了进口的sigma,乙酸钠是自己配制的,后来测了下PH,是5.1,是乙酸钠的原因吗?
5楼2011-10-11 09:38:44
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小翠迪

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 00:20:32:
既然本来是单一一条带,醇沉回收不是,那就是试剂或操作问题了,自己重新在仔细做一次吧

不知道为什么没办法给你加金币了,虽然还没找出确切原因,也谢谢啦
6楼2011-10-11 17:52:21
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asznpb

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小翠迪 at 2011-10-11 17:52:21:
不知道为什么没办法给你加金币了,虽然还没找出确切原因,也谢谢啦

呵呵,挺好的,回复你另外一个问题:质粒提取后的电泳最常见的就是3条带,分别是超螺旋,线性,解旋,所以可能是30min的时候本身就没切开,半个小时后目的条带切开了部分,但是没完全切好吧……你再多切一会可能还会有变化,既然这东西你搞不清就直接拿去测序就好了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

显微镜下的世界很精彩!
7楼2011-10-11 19:33:26
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小翠迪

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by asznpb at 2011-10-11 19:33:26:
呵呵,挺好的,回复你另外一个问题:质粒提取后的电泳最常见的就是3条带,分别是超螺旋,线性,解旋,所以可能是30min的时候本身就没切开,半个小时后目的条带切开了部分,但是没完全切好吧……你再多切一会可能 ...

哦,出现3条带是这个原因啊,明白了嘿嘿。测序结果显示质粒是没问题的,就是现在想再做下酶切,弄张漂亮的图片将来有用,没想到出现这样的问题。
8楼2011-10-11 21:05:29
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wangds

金虫 (正式写手)

回收为什么不用胶回收试剂盒?
9楼2011-10-11 21:40:40
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小翠迪

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wangds at 2011-10-11 21:40:40:
回收为什么不用胶回收试剂盒?

就是文献里面看很多人用的是这个办法,而且步骤比较简单,就先用的这个
10楼2011-10-11 22:27:45
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