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导致或抑制星号活性的因素
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1 导致星号活性的因素： 1) 较高的甘油浓度（>5% v/v）； 2) 酶与底物DNA比例过高（不同的酶情况不同，通常为>100 U/µg）； 3) 低盐浓度（<25 mM）； 4) 高pH值（>pH 8.0）； 5) 存在有机溶剂（如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane等）； 6) 用其他二价离子替代镁离子（如Mn2+，Cu2+，Co2+，Zn2+等）； 以上因素的影响程度因酶的不同而有所不同。例如EcoR I比 Pst I对甘油浓度更敏感，而后者则对高pH值更敏感一些。 2 抑制星号活性的方法： 1) 尽量用较少的酶进行完全消化反应。这样可以避免过度消化以及过高的甘油浓度。 2) 尽量避免有机溶剂（如制备DNA时引入的乙醇）的污染。 3) 将离子浓度提高到100-150 mM（若酶活性不受离子强度影响）。 4) 将反应缓冲液的pH值降到7.0。 5) 二价离子用Mg 2+。 [ Last edited by 西瓜 on 2011-10-4 at 00:40 ] |
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