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hcswj

木虫 (小有名气)

[交流] 菜鸟请教两个简单的问题，DNA杂交

1、两段互补的引物，是不是一定要反向杂交，即A链5'端到3'端与B链3'端到5'端依次互补才可以？我有一点模糊的印象，以前生物课好像讲过，但是记不清楚了。
2、如何验证两条链是否杂交成功，有什么简单的方法吗？以及如何计算杂交率。

谢谢！
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1楼 2011-10-01 15:03:26
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)
★
hcswj(金币+1):谢谢参与
这个完全可以找分子生物学实验书自己看看，问题就解决了
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2楼2011-10-01 18:20:09
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greeneese

铁杆木虫 (正式写手)
★
hcswj(金币+1):谢谢参与
hcswj(金币+5): 很感谢~ 2011-10-05 12:48:35
引用回帖:
1楼: Originally posted by hcswj at 2011-10-01 15:03:26:
1、两段互补的引物，是不是一定要反向杂交，即A链5'端到3'端与B链3'端到5'端依次互补才可以？我有一点模糊的印象，以前生物课好像讲过，但是记不清楚了。
2、如何验证两条链是否杂交成功，有什么简单的方法吗？以 ...

1 DNA自身杂交、RNA自身杂交和DNA与RNA的杂交都是反向的。
2 简单的方法里最明确的是电泳，看除了杂交原料之外是否有新的大碱基数的条带产生。更简单的是做紫外吸收，杂交发生后紫外吸收会下降，但不明确。
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3楼2011-10-03 10:05:55
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okaili

金虫 (初入文坛)
★
hcswj(金币+1):谢谢参与
hcswj(金币+5): 很感谢~ 2011-10-05 12:48:45
1. 反向杂交
2. 最简单的办法是做解旋温度曲线，即在从4度到80度缓慢加热情况下，对吸光度-温度做曲线。如果有突跃，证明有杂交，并且还能得到解旋温度（50%DNA杂交）。当然，跑PAGE胶（短链DNA）或琼脂胶（长链DNA），注意一定要是native胶，不能是加了尿素的denature胶。
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4楼2011-10-04 11:27:13
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