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迷失人鱼

金虫 (小有名气)

[求助] 多基因表达？？

求高手指点！！
一个质粒中插入4个或更多基因片段，每个基因前都有RBS。这四个基因全部能够很好的表达么？会不会最后一两个基因不能表达？
或者，能不能推荐些参考文献，综述之类的学习一下呢？
谢谢！！不胜感激~~
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1楼 2011-09-29 18:22:02
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~国庆快乐~ 2011-09-30 17:20:25
首先，插入的基因越多，你的载体就越不稳定。
其次你的目的是想表达一个融合蛋白呢还是四个单独的蛋白。如果是前者在一个启动子下依次连接四个基因，只需在第一个基因前加RBS，最后一个基因中设置终止密码子。如果是后者，你需要设置四个表达相关的元件，什么启动子啦、RBS、终止子等，甚至可能分别需要信号肽。要是这样做最可能的结果可能是第一个（和第二个）蛋白有表达，其他的无表达。
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2楼2011-09-30 10:05:44
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迷失人鱼

金虫 (小有名气)
谢谢！我要表达四个单独的蛋白。有没有办法可以稳定表达四个蛋白？都有些什么影响因素呢？十分感谢~
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3楼2011-09-30 17:03:01
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

迷失人鱼(金币+50): 谢谢！解答很实用！ 2011-10-01 14:46:03
如果在同一载体上连上四个不同的基因是不可行的。
目前商业化载体最多可以在一个载体上连接两个目的基因。
还有，你用的什么表达系统？
可以分别构建四个载体进行表达呀，这样也有利于你的下游纯化！
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4楼2011-10-01 10:33:55
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