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迷失人鱼

金虫 (小有名气)

[求助] 多基因表达??

求高手指点!!
一个质粒中插入4个或更多基因片段,每个基因前都有RBS。这四个基因全部能够很好的表达么?会不会最后一两个基因不能表达?
或者,能不能推荐些参考文献,综述之类的学习一下呢?
谢谢!!不胜感激~~
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~国庆快乐~ 2011-09-30 17:20:25
首先,插入的基因越多,你的载体就越不稳定。
其次你的目的是想表达一个融合蛋白呢还是四个单独的蛋白。如果是前者在一个启动子下依次连接四个基因,只需在第一个基因前加RBS,最后一个基因中设置终止密码子。如果是后者,你需要设置四个表达相关的元件,什么启动子啦、RBS、终止子等,甚至可能分别需要信号肽。要是这样做最可能的结果可能是第一个(和第二个)蛋白有表达,其他的无表达。
2楼2011-09-30 10:05:44
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迷失人鱼

金虫 (小有名气)

谢谢!我要表达四个单独的蛋白。有没有办法可以稳定表达四个蛋白?都有些什么影响因素呢?十分感谢~
3楼2011-09-30 17:03:01
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

迷失人鱼(金币+50): 谢谢!解答很实用! 2011-10-01 14:46:03
如果在同一载体上连上四个不同的基因是不可行的。
目前商业化载体最多可以在一个载体上连接两个目的基因。
还有,你用的什么表达系统?
可以分别构建四个载体进行表达呀,这样也有利于你的下游纯化!
4楼2011-10-01 10:33:55
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