24小时热门版块排行榜    

查看: 1238  |  回复: 10

liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求助v3-PCR,怎么p都是模模糊糊的感觉?

各位同学,我的样品是海水DNA,我多次PCR,都是一种模模糊糊的感觉,我把模板纯化还有PCR产物纯化,结果还是 不好。跑的时候连marker都不清楚,但是我觉得不是胶的原因。大家知道是什么原因吗?非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

don'tworry,behappy!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prettydog

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用的溴乙锭吗?可能是溴乙锭的问题
2楼2011-09-23 20:09:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

琼脂糖胶有没问题?V3这种短片段可以用2%的胶跑
3楼2011-09-24 09:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by prettydog at 2011-09-23 20:09:00:
你是用的溴乙锭吗?可能是溴乙锭的问题

用的是核酸染料,gelview。实验室都用的一样,别人的也没什么问题。应该不是染料的问题吧呵呵,谢谢。
don'tworry,behappy!
4楼2011-09-24 12:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-24 09:03:47:
琼脂糖胶有没问题?V3这种短片段可以用2%的胶跑

配的胶都是1%,跑了好多次了,都是这样,也不知道是什么原因。
don'tworry,behappy!
5楼2011-09-24 12:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runrain

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-27 10:37:45
会不会是电泳时候的电压和电流问题??感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶,跑20~30min就差不多了!
6楼2011-09-26 20:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by runrain at 2011-09-26 20:45:15:
会不会是电泳时候的电压和电流问题??感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶,跑20~30min就差不多了!

我也是用的120v跑的,30分钟,这一段时间实验室p的v3区pcr都不是太好。不知道是不是引物的原因,发愁啊
don'tworry,behappy!
7楼2011-09-27 19:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingleo99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个一看是你的PCR扩增条件不是很好,PCR的特异性不够。附上个我摸索出的条件你试试,这个条件我们实验室一直使用效果很不错。 94℃ 5min;94℃ 1min,63℃ 1min,72℃ 30S, 30个循环,72℃ 7min。引物用的是338和518
科学就是发现规律,而规律是上帝创造的,认识独一上帝就是智慧。
8楼2011-09-28 10:43:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rongzx0818

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们实验室的都是用85V的电压跑40--45min,Marker分得挺好的,条带也很清晰。
9楼2011-09-29 09:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runrain

金虫 (小有名气)

连marker都不亮而且还跑不开,应该不是引物的问题吧??如果marker很亮而且跑开了,我觉得还有可能是引物问题!!我觉得应该还是跑胶的问题!电流和电压没有问题的话,会不会就是做的胶或者染料有问题??
10楼2011-09-29 19:42:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liyixmu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +4 Faune 2026-03-21 4/200 2026-03-21 13:22 by zhukairuo
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +3 lemonzzn 2026-03-17 5/250 2026-03-21 11:28 by lemonzzn
[考研] 268求调剂 +7 简单点0 2026-03-17 7/350 2026-03-21 08:32 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
信息提示
请填处理意见