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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助v3-PCR，怎么p都是模模糊糊的感觉？
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liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求助v3-PCR，怎么p都是模模糊糊的感觉？

各位同学，我的样品是海水DNA，我多次PCR，都是一种模模糊糊的感觉，我把模板纯化还有PCR产物纯化，结果还是 不好。跑的时候连marker都不清楚，但是我觉得不是胶的原因。大家知道是什么原因吗？非常感谢
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don'tworry，behappy！
1楼 2011-09-23 16:12:40
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kingleo99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个一看是你的PCR扩增条件不是很好，PCR的特异性不够。附上个我摸索出的条件你试试，这个条件我们实验室一直使用效果很不错。 94℃ 5min；94℃ 1min，63℃ 1min，72℃ 30S, 30个循环，72℃ 7min。引物用的是338和518
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科学就是发现规律，而规律是上帝创造的，认识独一上帝就是智慧。
8楼2011-09-28 10:43:42
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prettydog

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用的溴乙锭吗？可能是溴乙锭的问题
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2楼2011-09-23 20:09:00
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girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

琼脂糖胶有没问题？V3这种短片段可以用2%的胶跑
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3楼2011-09-24 09:03:47
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by prettydog at 2011-09-23 20:09:00:
你是用的溴乙锭吗？可能是溴乙锭的问题

用的是核酸染料，gelview。实验室都用的一样，别人的也没什么问题。应该不是染料的问题吧呵呵，谢谢。
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don'tworry，behappy！
4楼2011-09-24 12:38:41
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