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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助v3-PCR，怎么p都是模模糊糊的感觉？
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liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求助v3-PCR，怎么p都是模模糊糊的感觉？

各位同学，我的样品是海水DNA，我多次PCR，都是一种模模糊糊的感觉，我把模板纯化还有PCR产物纯化，结果还是 不好。跑的时候连marker都不清楚，但是我觉得不是胶的原因。大家知道是什么原因吗？非常感谢
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don'tworry，behappy！
1楼 2011-09-23 16:12:40
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prettydog

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用的溴乙锭吗？可能是溴乙锭的问题
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2楼2011-09-23 20:09:00
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girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

琼脂糖胶有没问题？V3这种短片段可以用2%的胶跑
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3楼2011-09-24 09:03:47
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by prettydog at 2011-09-23 20:09:00:
你是用的溴乙锭吗？可能是溴乙锭的问题

用的是核酸染料，gelview。实验室都用的一样，别人的也没什么问题。应该不是染料的问题吧呵呵，谢谢。
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don'tworry，behappy！
4楼2011-09-24 12:38:41
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-24 09:03:47:
琼脂糖胶有没问题？V3这种短片段可以用2%的胶跑

配的胶都是1%，跑了好多次了，都是这样，也不知道是什么原因。
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don'tworry，behappy！
5楼2011-09-24 12:39:32
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runrain

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-27 10:37:45
会不会是电泳时候的电压和电流问题？？感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶，跑20~30min就差不多了！
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6楼2011-09-26 20:45:15
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liyixmu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by runrain at 2011-09-26 20:45:15:
会不会是电泳时候的电压和电流问题？？感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶，跑20~30min就差不多了！

我也是用的120v跑的，30分钟，这一段时间实验室p的v3区pcr都不是太好。不知道是不是引物的原因，发愁啊
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don'tworry，behappy！
7楼2011-09-27 19:21:40
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kingleo99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个一看是你的PCR扩增条件不是很好，PCR的特异性不够。附上个我摸索出的条件你试试，这个条件我们实验室一直使用效果很不错。 94℃ 5min；94℃ 1min，63℃ 1min，72℃ 30S, 30个循环，72℃ 7min。引物用的是338和518
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科学就是发现规律，而规律是上帝创造的，认识独一上帝就是智慧。
8楼2011-09-28 10:43:42
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rongzx0818

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们实验室的都是用85V的电压跑40--45min，Marker分得挺好的，条带也很清晰。
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9楼2011-09-29 09:40:45
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runrain

金虫 (小有名气)
连marker都不亮而且还跑不开，应该不是引物的问题吧？？如果marker很亮而且跑开了，我觉得还有可能是引物问题！！我觉得应该还是跑胶的问题！电流和电压没有问题的话，会不会就是做的胶或者染料有问题？？
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10楼2011-09-29 19:42:45
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