24小时热门版块排行榜    

查看: 1531  |  回复: 10

liyixmu

金虫 (小有名气)

[求助] 求助v3-PCR,怎么p都是模模糊糊的感觉?

各位同学,我的样品是海水DNA,我多次PCR,都是一种模模糊糊的感觉,我把模板纯化还有PCR产物纯化,结果还是 不好。跑的时候连marker都不清楚,但是我觉得不是胶的原因。大家知道是什么原因吗?非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

don'tworry,behappy!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

prettydog

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你是用的溴乙锭吗?可能是溴乙锭的问题
2楼2011-09-23 20:09:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

琼脂糖胶有没问题?V3这种短片段可以用2%的胶跑
3楼2011-09-24 09:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by prettydog at 2011-09-23 20:09:00:
你是用的溴乙锭吗?可能是溴乙锭的问题

用的是核酸染料,gelview。实验室都用的一样,别人的也没什么问题。应该不是染料的问题吧呵呵,谢谢。
don'tworry,behappy!
4楼2011-09-24 12:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by girlfisher at 2011-09-24 09:03:47:
琼脂糖胶有没问题?V3这种短片段可以用2%的胶跑

配的胶都是1%,跑了好多次了,都是这样,也不知道是什么原因。
don'tworry,behappy!
5楼2011-09-24 12:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runrain

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-09-27 10:37:45
会不会是电泳时候的电压和电流问题??感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶,跑20~30min就差不多了!
6楼2011-09-26 20:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyixmu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by runrain at 2011-09-26 20:45:15:
会不会是电泳时候的电压和电流问题??感觉marker都没跑开。我们一般都是用120V和100mA跑胶,跑20~30min就差不多了!

我也是用的120v跑的,30分钟,这一段时间实验室p的v3区pcr都不是太好。不知道是不是引物的原因,发愁啊
don'tworry,behappy!
7楼2011-09-27 19:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kingleo99

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个一看是你的PCR扩增条件不是很好,PCR的特异性不够。附上个我摸索出的条件你试试,这个条件我们实验室一直使用效果很不错。 94℃ 5min;94℃ 1min,63℃ 1min,72℃ 30S, 30个循环,72℃ 7min。引物用的是338和518
科学就是发现规律,而规律是上帝创造的,认识独一上帝就是智慧。
8楼2011-09-28 10:43:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rongzx0818

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们实验室的都是用85V的电压跑40--45min,Marker分得挺好的,条带也很清晰。
9楼2011-09-29 09:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

runrain

金虫 (小有名气)

连marker都不亮而且还跑不开,应该不是引物的问题吧??如果marker很亮而且跑开了,我觉得还有可能是引物问题!!我觉得应该还是跑胶的问题!电流和电压没有问题的话,会不会就是做的胶或者染料有问题??
10楼2011-09-29 19:42:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liyixmu 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +3 瞬息宇宙 2026-08-31 3/150 2026-09-01 14:26 by Wei_ren
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见